[发明专利]一种稳定性同位素18O标记的尼泊金酯的合成方法

说明书

本发明涉及一种稳定性同位素18O标记的尼泊金酯的合成方法，利用稳定同位素¹⁸O‑水为原料，利用¹⁸O‑水不同投料量，与苯甲酸‑4‑重氮硫酸盐反应，并经柱层析硅胶分离分别得到中间产品尼泊金酸‑¹⁸O或尼泊金酸‑¹⁸O₂。接着在催化剂和有机溶剂的条件下与羟基化合物缩合反应，最后分离纯化得到目标产品尼泊金酯‑¹⁸O或尼泊金酯‑¹⁸O₂。本发明制备的¹⁸O标记的尼泊金酯系列产品，化学纯度均高于98％，稳定同位素丰度均高于95％atom¹⁸O，可以充分满足用于食品、化妆品中尼泊金酯类防腐剂的含量检测的质谱检测内标物质。

技术领域

本发明属于稳定同位素标记化合物合成技术领域，尤其是涉及一种稳定性同位素¹⁸O标记的尼泊金酯的合成方法。

背景技术

1932年尼泊金酯正式作为防霉剂和杀菌剂被批准应用于食品中，后来又应用于化妆品、医药等领域。其中在食品行业中，尼泊金酯类作为被国际上公认的广谱性高效食品防腐剂，被美国、欧洲、日本、加拿大、中国、俄罗斯等国陆续批准在食品中应用，目前主要应用于酱油、醋等调味品、腌制品、烘焙食品、酱制品、饮料、黄酒以及果蔬保鲜等领域。中国食品添加剂使用卫生标准(GB2760-2007)中也规定尼泊金乙酯、尼泊金丙酯以及尼泊金甲酯钠、尼泊金乙酯钠、尼泊金丙酯钠盐可以作为食品防腐剂，并规定用量在0.012-0.5g/kg之间(以对羟基苯甲酸计)。在化妆品行业中，中国化妆品卫生规范中规定尼泊金酯类防腐剂在化妆品中单一酯的最高限量为0.4％，混合酯为0.8％。尼泊金酯类防腐剂作用机制主要是破坏微生物的细胞膜，使细胞内的蛋白质变性，并可抑制微生物细胞的呼吸酶系与电子传递酶系的活性。尼泊金酯的抑菌活性主要是分子态起作用，且其分子内的羧基已经酯化，不再电离，所以它在pH3～8的范围内均有很好的抑菌效果。

目前尼泊金酯类防腐剂的危害逐渐被报道，有研究表明化妆品中过量使用尼泊金酯类防腐剂可引起接触性皮炎。还有研究报道尼泊金酯会在人体内累积，增加女性患乳腺癌和子宫癌的风险，在大量乳腺癌患者的病理切片中发现有大量尼泊金酯的残留。更严重的是孕妇使用过量尼泊金酯类防腐剂会引起新生儿生殖器畸形。

稳定同位素稀释质谱法IDMS(Isotope Dilution Mass Spectrometry)是将已知质量和丰度的浓缩稳定同位素作为内标物加入样品中混合，通过测量相应质量数离子比值并与标准比值比较，从而测定出该物质在样品中的含量。液相色谱与高分辨率质谱联用仪具有准确、高效、灵敏等特点，被广泛运用于食品、化妆品中添加剂含量检测。利用稳定同位素标记尼泊金酯系列产品，可为更准确的定量检测食品、化妆品中尼泊金酯类防腐剂含量提供标准试剂。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种稳定同位素原子利用率高，适合稳定同位素标记的专用合成技术的稳定性同位素¹⁸O标记的尼泊金酯的合成方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种稳定性同位素¹⁸O标记的尼泊金酯的合成方法，采用以下步骤：

(1)在反应器中加入干燥的有机溶剂，控制反应温度为-10～10℃，加入苯甲酸-4-重氮硫酸盐，再缓慢滴加¹⁸O-水，低温反应2h～12h，再升高反应温度至60～100℃反应1h～12h，然后室温搅拌4h～24h，旋转蒸发浓缩至干，然后利用硅胶柱层析分离得到中间产品尼泊金酸-¹⁸O或尼泊金酸-¹⁸O₂；