[发明专利]葡萄糖氧化酶-DNAzyme复合水凝胶及其在葡萄糖检测中的应用

权利要求书

1.葡萄糖氧化酶-DNAzyme复合水凝胶，其特征在于，所述的复合水凝胶为葡萄糖氧化酶和DNAzyme复合的水凝胶，其水凝胶骨架结构为：

m与n的比为2000:1至10:1，优选800:1至100:1。

2.如权利要求1所述的葡萄糖氧化酶-DNAzyme复合水凝胶，其特征在于，所述的复合水凝胶是以5’端连有甲基丙烯酰胺的具有过氧化酶活性的DNAzyme和丙烯酰胺作为聚合单体，以甲叉双丙烯酰胺作为交联剂，在自由基聚合的过程中将葡萄糖氧化酶包埋在水凝胶中得到。

3.如权利要求1或2所述的葡萄糖氧化酶-DNAzyme复合水凝胶，其特征在于，DNAzyme为具有过氧化酶活性的DNA，水凝胶中丙烯酰胺单体的质量百分比为4％～20％。

4.如权利要求1所述的葡萄糖氧化酶-DNAzyme复合水凝胶的制备方法，其特征在于，

(1)DNAzyme的制备：利用DNA合成仪将3-氰乙基-二异丙基-6-甲基丙烯酰胺基亚磷酰胺接入到DNA的5'端得到Acrydite-DNA；取Acrydite-DNA，加入缓冲液，混合物在80-95℃下反应，然后缓慢冷却至室温。加入氯化血红素在室温下孵育10-60min，优选20-40min，制得DNAzyme；

(2)向制备好的DNAzyme溶液中依次加入丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺，葡萄糖氧化酶溶液、10％过硫酸铵、10％N,N,N',N'-四甲基乙二胺，迅速混匀后，室温静置，用相机记录反应完之后胶块的状态。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的缓冲液为：30-80mM吗啉乙磺酸(MES)pH 6-7；50-200mM三羟甲基氨基甲烷(Tris)-醋酸盐缓冲液；20-50mM醋酸钾；1％二甲基亚砜(DMSO)；0.05％Triton X-100。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰胺的摩尔比为7～30:1，丙烯酰胺单体和DNAzyme的摩尔比为10～2000:1，优选：800:1至100:1。

7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中葡萄糖氧化酶溶液的浓度为5～1000μM，优选为50～500μM。

8.权利要求1-3任何一项所述的葡萄糖氧化酶-DNAzyme复合水凝胶在葡萄糖检测中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的复合水凝胶能够且不限于应用于葡萄糖的比色检测及对复杂生物样品中葡萄糖的直接比色检测。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，将葡萄糖氧化酶-DNAzyme复合水凝胶块放入被检测葡萄糖样品溶液中，随后加入染料指示剂，根据水凝胶的颜色变化，定性且半定量地判定葡萄糖浓度，所述的染料指示剂为3,3’,5,5’-四甲基联苯胺或2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐。