[发明专利]一种复合菌制剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有降低养殖水中亚硝酸盐作用的复合菌制剂，其特征在于，该复合菌制剂的制备方法为：

（1）取凝结芽孢杆菌斜面，用接种环挑取2环菌苔，接种于营养肉汤中，37℃条件下摇床培养16小时，得到活化菌液；取丁酸梭菌甘油管种子，接种于RCM培养基中，37℃条件下静置培养24小时，得到活化菌液；取嗜酸乳杆菌和产朊假丝酵母斜面各一支，用接种环挑取2环嗜酸乳杆菌菌苔，接种于YPD液体培养基中，然后用接种环挑取产朊假丝酵母菌苔，接种于同一个YPD液体培养基中，28℃条件下静置培养3天，得到乳酸菌和酵母菌混合种子液；

（2）发酵培养基的配制：葡萄糖10g/L，酵母粉3g/L，氯化钠1g/L，豆粕16g/L，玉米浆粉5g/L，磷酸氢二钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸锰0.2g/L，硫酸亚铁0.2g/L，碳酸钙6g/L；调节pH7.0±0.2，121℃灭菌30分钟，然后冷却；

（3）取凝结芽孢杆菌活化菌液，按3%接种量接种于发酵罐无菌发酵培养基中，37℃、1:0.5通气量、200rpm搅拌培养4小时，然后不通气、80rpm搅拌培养2小时，此时凝结芽孢杆菌出芽率为零；

（4）取丁酸梭菌活化菌液，按5%接种量接种于上述步骤（3）所述发酵罐中，37℃、不通气、80rpm搅拌培养24小时，出芽率达到90%以上；

（5）取乳酸菌和酵母菌混合种子液，按5%接种量接种于上述步骤 （4）所述发酵罐中，降温至30℃继续培养3天，得到以丁酸梭菌为主体的复合菌制剂。