[发明专利]一种改进的开放染色质检测方法及其试剂盒和应用

权利要求书

1.一种细胞核提取方法，其特征在于，将细胞组织研磨成粉末后加入PBS重悬，离心并去除上清，再向沉淀中加入裂解液，充分裂解后离心并去除上清，沉淀用PBS重悬，将重悬后的样品过40μm滤膜得到含细胞核的滤液；

所述裂解液包含以下终浓度的各组分：50mM HEPES（pH 7.5），140 mMNaCl，1 mM EDTA（pH 8.0），0.5% NP-40，0.25% TritonX-100。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解液还包含终浓度10% glycerol。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞组织与裂解液的质量体积比为5～10 mg：1～2mL。

4.权利要求1～3任一项所述方法在开放染色质检测中的应用。

5.一种改进的开放染色质检测方法，其特征在于，利用权利要求1或2所述方法提取细胞组织的细胞核，然后对滤液中的细胞核进行计数，挑取50，000细胞核于PBS中，离心并去除上清，向沉淀中加入转座体系，进行转座反应；然后对已转座的DNA进行纯化，再进行PCR扩增，最后将PCR产物纯化后测序。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述对已转座的DNA进行纯化为用AMPurebeads进行纯化：向已转座的DNA中加入AMpure beads，混匀后静置，再置于磁分离架上静置分离，然后去除上清并用80%乙醇溶液洗涤，重复该步骤，去除残留的乙醇溶液，最后用EB溶液洗脱。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述已转座的DNA与AMpure beads的体积比为1：2～3。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR产物纯化为用AMPure beads进行纯化：向PCR反应产物中加入终浓度为0.65×的AMpure beads，混匀后静置，再置于磁分离架上静置分离，将上清液转到新管中，加入终浓度为1.8×的AMpure beads，混匀后静置，再置于磁分离架上静置分离，然后去除上清并用80%乙醇溶液洗涤，重复该步骤，去除残留的乙醇溶液，最后用EB溶液洗脱。

9.权利要求5～8任一项所述方法在冰冻组织开放染色质检测中的应用。

10.一种用于开放染色质检测的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1或2所述的裂解液。