[发明专利]一种高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法

权利要求书

1.一种高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法，其特征在于，步骤如下：

1）选取成熟未开裂的铁皮石斛蒴果，采用清水冲洗后，放入0.1%升汞溶液中浸泡3-4min，取出后，采用无菌水冲洗2-3次，然后放入预处理液中浸泡7-10min，取出后，采用无菌水冲洗4-5次，吸干表面水分，获得预处理铁皮石斛蒴果，所述预处理液由柠檬酸和酒精组成；

2）将预处理铁皮石斛蒴果切开，将种子均匀散布在萌发培养基上，在组培室内进行培养，在温度为22-24℃、光照时间为8h/d、光照强度为1000-1200lux的条件下培养19-22天，获得原球茎；

3）将原球茎转接至增殖培养基中，在温度为23-25℃、光照时间为8h/d、光照强度为2000-2500lux的条件下培养24-25天，获得类原球茎；

4）将类原球茎转接至分化培养基中，在温度为23-25℃、光照时间为12h/d、光照强度为2000-2500lux的条件下培养26-28天，获得幼苗；

5）将幼苗转接至含有育苗培养基的组培瓶中，在温度为23-25℃、光照时间为15h/d、光照强度为2800-3000lux的条件下培养80-90天，获得壮苗；

6）将含有壮苗的组培瓶送入炼苗房内，进行12-15天的炼苗，获得炼后苗；

7）将炼后苗从组培瓶中取出，采用清水洗除根部携带的培养基，即可获得组培苗。

2.根据权利要求1所述的高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法，其特征在于，所述预处理液的制备方法为：取10g柠檬酸，投入至100mL的85%酒精中，搅拌混合均匀后，即可。

3.根据权利要求1所述的高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法，其特征在于，所述萌发培养基由1/2MS培养基和萌发促进液组成。

4.根据权利要求3所述的高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法，其特征在于，所述萌发培养基的制备方法如下：取野马追，清洗，烘干后，粉碎，投入至渗漉器中，采用12-15倍重量的70%酒精进行渗漉处理，获得渗漉提取液和渗漉残渣，将渗漉残渣加入4-5倍重量的70%酒精，然后超声波处理40-50min，过滤，获得超声波提取液和超声波提取残渣，将渗漉提取液和超声波提取液合并，加入总重量3%的壳寡糖，搅拌混合均匀后，蒸发浓缩为原体积的20%，即得萌发促进液，将萌发促进液按照30g/L的量加入至1/2MS培养基中，即可。

5.根据权利要求1-4任一所述的高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法，其特征在于，所述增殖培养基采用MS培养基并加入10g/L香蕉汁和2g/L乙二胺四乙酸二钠组成。

6.根据权利要求5所述的高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法，其特征在于，所述分化培养基采用MS培养基并加入15g/L山药汁和0.4g/L萘乙酸组成。

7.根据权利要求5所述的高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法，其特征在于，所述育苗培养基由MS培养基和育苗促进液组成。

8.根据权利要求7所述的高成活率的铁皮石斛组培苗培育方法，其特征在于，所述育苗培养基的的制备方法如下：取乌蔹莓干草，清洗，烘干后，粉碎，投入至渗漉器中，采用10-12倍重量的70%酒精进行渗漉处理，获得渗漉提取液和渗漉残渣，将渗漉残渣加入6-8倍重量的70%酒精，然后超声波处理40-50min，过滤，获得超声波提取液和超声波提取残渣，将渗漉提取液和超声波提取液合并，加入总重量5%的壳寡糖，搅拌混合均匀后，蒸发浓缩为原体积的15%，即得育苗促进液，将育苗促进液按照20g/L的量加入至MS培养基中，即可。