[发明专利]一种从微生物发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法

权利要求书

1.一种从微生物发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）胞二磷胆碱发酵液经加热，絮凝，固液分离得到清液，清液经超滤、纳滤连续式预处理得到预处理液；

（2）预处理液通过预柱进行预处理，流出液经纯化柱吸附，再经氯化钠溶液洗脱，洗脱液合并后再经减压浓缩、醇沉结晶，得到胞二磷胆碱钠粗品；

（3）将胞二磷胆碱钠粗品溶解，经活性炭脱色后过滤，过滤清液经真空减压浓缩，醇沉结晶后真空干燥，得到胞二磷胆碱钠成品。

2.根据权利要求1所述的发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法，其特征在于：所述的微生物发酵液为大肠杆菌发酵液。

3.根据权利要求2所述的发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法，其特征在于：所述胞二磷胆碱大肠杆菌发酵液加热后，加入絮凝剂絮凝，加热温度为70-100℃，加热时间30-60min。

4.根据权利要求1或3所述的从微生物发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法，其特征在于：所述絮凝剂为酸溶性壳聚糖或者聚乙烯亚胺，用量为0.05-1%。

5.根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法，其特征在于：所述步骤（1）中固液分离方式为板框过滤或者管式离心分离，或者100000-500000道尔顿的陶瓷膜微滤；固液分离所得清液经2000-20000道尔顿的超滤膜超滤，100-500道尔顿的纳滤膜纳滤。

6.根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法，其特征在于：所述步骤（2）中预处理液调节pH2-14；所述洗脱液调节pH5.5-7.5。

7.根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法，其特征在于：所述步骤（2）中减压浓缩至胞二磷酸胆碱钠浓度为200-400g/L；结晶条件是：加入料液体积4-6倍的乙醇，于4-25℃、80-120rpm的条件下搅拌12-24h；晶体过滤后用60-90%乙醇按体积比1:1淋洗。

8.根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法，其特征在于：所述预柱为强碱性阴离子交换树脂，所述纯化柱为强碱性阴离子交换树脂。

9.根据权利要求8所述的从大肠杆菌发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法，其特征在于：所述强碱性阴离子交换树脂为201*7、201*4、202中的一种或几种；上柱流速1-5BV/h，洗脱流速0.5-3BV/h；所述氯化钠溶液浓度为0.05-0.5mol/L。

10.根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，将胞二磷胆碱钠粗品复溶于去离子水至30-200g/L，活性炭常温脱色30min后经过0.22μm滤膜过滤，减压浓缩至200-400g/L；结晶条件是：加入料液体积4-8倍的乙醇，于4-25℃、80-120rpm的条件下搅拌12-24h；晶体过滤后用60-90%乙醇按体积比1:1淋洗；真空干燥温度为40-45℃。