[发明专利]一种NGAL的免疫比浊检测试剂和方法

说明书

本发明公开了一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL，neutrophil gelatinase associated lipocalin）的胶乳增强免疫比浊检测试剂。该试剂为单试剂，试剂主要成分是NGAL抗体标记的胶乳颗粒，同时还包括缓冲溶液、表面活性剂、盐、稳定剂、助悬剂以及防腐剂。本发明还公开了使用该试剂利用透射或者散射比浊原理检测血样中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的浓度的方法。本发明采用单一试剂，操作简单，无需混合，灵敏度高，线性范围广，能够直接测量全血、血清和血浆等各种样本，可以广泛应用于各种透射或者散射分析仪，包括普通生化分析仪、特定蛋白分析仪等。

技术领域

本发明属于医学免疫诊断领域，具体涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备及其应用。

背景技术

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（Neutrophil gelatinase-associatedlipocalin,NGAL）又称人脂质运载蛋白2(lipocalin2,Ln2)或噬铁蛋白(siderocalin)，是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。近年来，NGAL作为一种新的肾损伤标志物倍受关注。早期急性肾损伤、慢性肾病、心肾综合症等疾病血清和尿液中NGAL会显著升高，且其水平监测对病情轻重、疗效及预后判断具有较好的诊断价值。急性肾损伤（Acute kidney injury，AKI）是由各种原因引起的肾功能在短时间（几小时至几天）内突然下降而出现的临床综合征，是威胁重症患者生命的常见疾病。重症监护病房中约50%的患者可合并此症，AKI的终末阶段急性肾功能衰竭（Acute renal failure，ARF），其病死率高达26.5-45.0%。目前探寻一种稳定、特异、敏感的早期诊断标志物，以期达到早期诊断、早期防治AKI，成为降低重症患者病死率的关键。传统的诊断指标（如血肌酐、尿素氮等）受影响因素众多，既不敏感也无特异性，无法满足AKI的临床早期诊断需要，现研究表明中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白，是诊断急性肾损伤的最有效生物学标志之一。

NGAL的常见检测方法有胶体金法、免疫层析法、免疫荧光法、胶乳增强免疫比浊法（Particles Enhanced Turbidity Immuno-Assay - PETIA）、磁微粒子化学发光。这些方法中以胶乳增强免疫比浊法使用最广泛，相对胶体金法和免疫层析法的测试时仪器的自动化程度高，因而重复性和准确度高。同时与免疫荧光法和磁微粒子化学发光法相比较，三者都拥有较高灵敏度、重复性和准确度，但是免疫比浊试剂可以在绝大多数透射仪或散射仪上应用，测定时间短，成本相对更低。胶乳增强免疫比浊法（PETIA）是利用吸附在直径几十到几百纳米的胶乳微粒上的NGAL抗体捕捉测试样品中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL），从而形成微粒之间的交联，改变了溶液的散射度或者透射吸光度（即浊度）。通过测量溶液的散射度或者透射吸光度的变化，可以根据定标曲线定量地计算出测试样品中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的浓度。该测试方法既可以在通用的大型自动生化分析仪上运用，也可以在特定蛋白分析仪等小型的POCT（即时检测）设备上采用，有很强的适用性，可以很好地满足我国从大型三甲医院到社区基层医院的使用需求。

现在市场上已有的NGAL胶乳增强免疫比浊试剂以北京利德曼生化股份有限公司的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白测定试剂盒（京械注准20172400144）为代表，采用的是稀释液和胶乳溶液的双试剂形式。在测试时，测试样品必须先在稀释液中稀释，再和胶乳溶液进行混合反应，然后在透射或者散射仪上测试。稀释和混合的操作必须在全自动生化分析仪（三甲医院常用仪器平台）上可以由机器自动操作，但是在小型半自动平台上尤其是POCT类的便携式平台（三级以下医院以及县乡一级医疗服务单位常用）上进行的测试则需要操作人员手动实施，带来了额外的操作步骤，也引入了更多的操作误差，降低了测试的精密度，不利于该检测在中小型医院的推广实施。现有市场上的NGAL胶乳增强免疫比浊试剂的另一个缺点是只能测量血清或者血浆样本中的NGAL含量，对全血样本必须进行提取血清的前处理工作，耗时费力，重复性差，在临床的实际使用中很不方便。

发明内容