[发明专利]一种三疣梭子蟹抗脂多糖因子及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种三疣梭子蟹抗脂多糖因子及其制备方法与应用，涉及三疣梭子蟹基因工程，该三疣梭子蟹抗脂多糖因子的基因序列如SEQ NO.1所示；本发明还提供一种制备三疣梭子蟹抗脂多糖因子的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)构建三疣梭子蟹抗脂多糖因子重组表达载体；(2)将步骤(1)所得重组表达载体导入宿主细胞，并将宿主细胞进行诱导表达，获得表达产物；(3)将分离纯化步骤(2)所得的表达产物，获得重组蛋白，即三疣梭子蟹抗脂多糖因子；与现有技术相比，本发明具有如下优点：抗脂多糖因子可能广泛参与了三疣梭子蟹抗微生物感染的先天免疫反应，重组蛋白在动物饲料添加剂和抗病原微生物新药物开发上显示出诱人的应用前景。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种三疣梭子蟹抗脂多糖因子及其重组蛋白制备方法和应用。

背景技术

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)是一种重要的海产经济蟹类，由于其营养丰富、生长迅速等优点，已成为我国重要海水养殖品种。但随着养殖规模不断扩大以及集约化程度不断提高，由细菌、真菌等引起的多种疾病在三疣梭子蟹养殖群体中频频爆发，造成了巨大的经济损失，严重制约了三疣梭子蟹养殖产业的健康可持续发展。

目前蟹病的防治仍主要采用传统抗生素药物防治，但长期盲目滥用药物，容易造成耐药性等问题，导致产品质量下降，环境污染及对人类健康构成潜在威胁等不良后果。因此，这就迫切需要从三疣梭子蟹自身的免疫防御因子入手研究其抗病机制和开发新型的抗菌药物进行免疫防治。

抗脂多糖因子(ALF)是一种能够结合脂多糖(LPS)并中和其毒性作用的小分子抗菌肽，因其作用机制与传统抗生素不同，细菌不易产生耐药性，对正常真核细胞无毒害，日益受到广泛关注。ALF最初是从鲎中发现，它可以结合LPS，并对R型革兰氏阴性菌有明显的抑制生长作用。晶体结构分析表明，鲎ALF结构中有两个高度保守的半胱氨酸残基，它们形成二硫键所限制的β折叠区域即为LPS结合域。体外合成鲎ALF的 LPS结合域，证明其确实可以与LPS结合，能够在体外调节细胞因子的分泌，有助于保护小鼠免受内毒素的攻击。随后，从对虾、螯虾、蟹等甲壳动物中也鉴定或克隆出多种抗脂多糖因子。研究表明这些甲壳动物ALF的表达水平在细菌刺激后明显上调，其重组蛋白能够抑制革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的生长，提示ALF在甲壳动物固有免疫中发挥重要作用。

到目前为止，关于三疣梭子蟹抗脂多糖因子的报道较少。因此，识别、定性抗菌效应分子-抗脂多糖因子对研究三疣梭子蟹的免疫防御机制和进行病害防治具有重要的理论和实践意义。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是针对现有技术的现状提供一种三疣梭子蟹抗脂多糖因子。

本发明所要解决的另一个技术问题是针对现有技术的现状提供一种制备三疣梭子蟹抗脂多糖因子的方法。

本发明所要解决的又一个技术问题是针对现有技术的现状提供一种三疣梭子蟹抗脂多糖因子的应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该三疣梭子蟹抗脂多糖因子，其特征在于：所述三疣梭子蟹抗脂多糖因子的基因序列如SEQ NO.1所示。

进一步地，所述的三疣梭子蟹抗脂多糖的氨基酸序列为Met Ser Arg Ile SerLeu Leu Leu Val Leu Leu Ser Ile Val Leu Val Ala Pro Ser Gln Asp Tyr Leu LysGlu Glu Leu Phe Asn Glu Val Lys Asp Ala Leu Phe Asp Phe Gly Ala Ile Glu IleLeu Asp Arg Val Cys Asn Tyr Arg Val Met Pro Arg Phe Glu Asn Trp Arg Phe TyrPhe Lys Gly Asp Val Trp Cys Pro Gly Trp Thr Phe Ile Lys Gly Glu Ser Leu。