[发明专利]一种相对定量分析肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的方法

权利要求书

1.一种相对定量分析肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的方法，其特征在于，先进行肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的提取，再对肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1进行酶切获得特异性肽段，然后使用液质联用仪检测特异性肽段的子母离子对，获得特异性肽段的子离子信号强度总和，根据特异肽段的子离子信号强度总和获得肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的信号强度，通过比较不同处理肉鸡样品中肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的信号强度，从而实现对不同处理肉鸡样品中肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的相对定量；

所述肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的特异性肽段为2条，2条特异性肽段的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示；

其中，SEQ ID NO:1：Asp-Ser-Gly-Glu-Leu-Trp-Leu-Asp-Ala-Tyr-Leu-His-Lys；

SEQ ID NO:2：Trp-Leu-Val-Ile-Asp-Arg。

2.根据权利要求1所述的相对定量分析肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的方法，其特征在于，SEQ ID NO:1所示的特异性肽段的母离子为773.9m/z，子离子为1045.5m/z，746.4m/z，859.5m/z，子离子所对应的碰撞电压为35～40V；SEQ ID NO:2所示的特异性肽段的母离子为401.2m/z，子离子为403.2m/z，615.4m/z，502.3m/z，子离子所对应的碰撞电压为20～25V。

3.根据权利要求2所述的相对定量分析肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的方法，其特征在于，SEQ ID NO:1所示的特异性肽段的信号强度为子离子1045.5m/z，746.4m/z，859.5m/z的信号强度总和，SEQ ID NO:2所示的特异性肽段的信号强度为子离子403.2m/z，615.4m/z，502.3m/z的信号强度总和，肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的信号强度为SEQ ID NO:1所示的特异性肽段和SEQ ID NO:2所示的特异性肽段这两条特异性肽段的信号强度总和。

4.根据权利要求1所述的相对定量分析肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的方法，其特征在于，先采用液质联用仪中的高效液相色谱对2条特异性肽段进行分离，然后进入质谱进行检测；其中，分离2条特异性肽段的条件为：色谱柱为C18填料的毛细管色谱柱，流速设置在200～500nL/min，流动相A为：水+0.1wt％甲酸+5wt％DMSO，流动相B为：乙腈+0.1wt％甲酸+5wt％DMSO，在分离2条特异性肽段时采用梯度洗脱，流动相梯度为：0～1min，95％A；1～1.1min，90％A；1.1～60min，80％A；60～70min，76％A；70～75min，50％A；75～75.5min，20％A；75.5～80.5min，20％A；80.5～81min，95％A；81～90min，95％A。

5.根据权利要求1所述的相对定量分析肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的方法，其特征在于，肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的提取步骤为：使用蛋白质提取缓冲液提取不同处理下肉鸡组织中的肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1，并对提取到的总蛋白质定量；

酶切肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1获得特异性肽段步骤为：取不同处理样品的总蛋白质，先打开二硫键再封闭蛋白质内部巯基，然后依次加入胞内蛋白酶和胰蛋白酶进行酶切，终止酶切反应后，得到特异性肽段。

6.根据权利要求5所述的相对定量分析肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的方法，其特征在于，在肉鸡脂肪酸去饱和酶的提取步骤中，所述蛋白质提取缓冲液的成分为：50～100mMTris-HCl，0.1～0.5M NaCl，10～20mM二硫苏糖醇，0.5～2wt％十二烷基麦芽糖苷，pH 7.2～8.0；使用蛋白质提取缓冲液在90～100℃下水浴中提取不同处理下肉鸡组织中的肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1 15～30min。

7.根据权利要求5所述的相对定量分析肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的方法，其特征在于，在酶切产生特异性肽段步骤中，先使用二硫苏糖醇打开二硫键，再通过乙酰胺封闭蛋白质内部巯基，添加甲酸或三氟乙酸终止酶切反应。

8.根据权利要求5所述的相对定量分析肉鸡脂肪酸去饱和酶FADS1的方法，其特征在于，在酶切产生特异性肽段步骤中，依次加入胞内蛋白酶和胰蛋白酶进行酶切的具体步骤为：先按照胞内蛋白酶和总蛋白的质量比为1:100～200的比例加入胞内蛋白酶，酶切总蛋白4～6小时后，再按照胰蛋白酶和总蛋白的质量比为1:30～60的比例加入胰蛋白酶，酶切12～16小时。