[发明专利]基于荧光定量PCR检测翘嘴鳜的引物和探针及其试剂盒与方法

权利要求书

1.一种基于荧光定量PCR检测翘嘴鳜的引物和探针，包括上游引物FP、下游引物BP、探针Probe，其核苷酸序列分别如下所示：

FP：5-CACCATAAAACTATATTAACCATA-3；

BP：5-CAAGGTATATCTTGACTTATGA-3；

Probe：5-FAM-TTTCGTCAGTCTTACTTCCATTTATGT-TAMRA-3，其中5端标记的荧光基团是FAM，3端标记的淬灭基团是TAMRA。

2.如权利要求1所述的基于荧光定量PCR检测翘嘴鳜的引物和探针，其特征在于：扩增反应时，FP引物、BP引物和探针的摩尔比为：2：2：1。

3.一种基于荧光定量PCR检测翘嘴鳜的试剂盒，其特征在于，试剂盒包含权利要求1或2中所述的检测引物和探针。

4.根据权利要求3所述的基于荧光定量PCR检测翘嘴鳜的试剂盒，其特征在于，还包括以下成分的部分或者全部：(1)PCR MIX反应液；(2)去离子水；(3)阳性对照和阴性对照。

5.根据权利要求4所述的基于荧光定量PCR检测翘嘴鳜的试剂盒，其特征在于：所述的PCR MIX反应液含有：5U Taq酶，2.5mM dNTPs，25mM MgCl2，2×PCR buffer。

6.根据权利要求4所述的基于荧光定量PCR检测翘嘴鳜的试剂盒，其特征在于：阳性对照为含有翘嘴鳜特异性基因片段的T载体克隆，阴性对照为不含有翘嘴鳜特异性基因片段的水或其他溶剂。

7.一种基于荧光定量PCR检测翘嘴鳜的方法，包括如下步骤：

(1)待检样品DNA的提取；

(2)荧光定量PCR反应体系的配制：将步骤(1)中提取的待检样品DNA加入荧光定量PCR反应体系，混匀后离心，所述荧光定量PCR反应体系中含有如权利要求1或2中所述的引物和探针；

(3)荧光定量PCR反应：设置阳性对照和阴性对照，将配好的荧光定量PCR反应体系置于荧光定量PCR仪后开始反应，反应程序如下：95℃反应10min；95℃反应15sec，60℃反应60sec，45个循环，每循环延伸结束时收集荧光信号；

(4)结果判断：通过观察荧光定量PCR的扩增曲线判断扩增结果。

8.如权利要求7所述的基于荧光定量PCR检测翘嘴鳜的方法，其特征在于：荧光定量PCR反应体系为25μL反应体系，其含有10μmol/L FP和BP引物各1μL，10μmol/L探针0.5μL，PCRMIX反应液12.5μL，模板5μL，用去离子水补齐到25μL。