[发明专利]鉴定单增李斯特菌1/2c血清型的NASBA检测方法有效
| 申请号： | 201711229374.0 | 申请日： | 2017-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN107723348B | 公开（公告）日： | 2021-03-30 |
| 发明（设计）人： | 陆兆新;陶婷婷;别小妹;吕凤霞;张充 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6865 | 分类号： | C12Q1/6865;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 张素卿 |
| 地址： | 21009*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴定 李斯特 血清 nasba 检测 方法 | ||
1.一种鉴定单增李斯特菌1/2c血清型的NASBA检测方法，其特征在于，该方法用于非疾病诊断性检测，所述NASBA检测方法特异性引物序列如下：
正向引物NM2c-F序列为5’-GAAATACATTTTGGTCTAG-3’，
反向引物NM2c-R序列为5’-aattctaatacgactcactatagggATTACTGGGAATAACTTGA-3’；
所述NASBA检测方法用分子信标探针MB2c，其序列为5’-JOE-CGATCGAGGAAATGCTTATGCAGATATTACGATCG-DABCYL-3’。
2.根据权利要求1所述鉴定单增李斯特菌1/2c血清型的NASBA检测方法，其特征在于，所述NASBA检测方法包括以下步骤：
(1)单增李斯特菌RNA提取
收集对数后期的菌悬液细胞，加入溶菌酶，采用Trizol法进行RNA提取，将所得到的RNA溶液置于-70℃保存；
(2)实时NASBA反应
将反应溶剂和KCl溶液混匀，备用，在八联管中加入RNA模板，再加入反应混合液，同时加入引物和分子信标，混匀；65℃加热2min，41℃温浴2min，迅速加入酶混合液，41℃反应90min，每2min收集一次荧光信号，以NASBA水作为空白对照；
(3)定性分析
反应结果通过Ct值来判断，Ct值大于35则为阴性，Ct值小于35则为阳性。
3.根据权利要求1或2所述鉴定单增李斯特菌1/2c血清型的NASBA检测方法，其特征在于，所述NASBA反应体系如下:
4.权利要求1-3任一项所述鉴定单增李斯特菌1/2c血清型的NASBA检测方法所用的特异性引物NM2c-F/R和分子信标探针MB2c。
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