[发明专利]一种缺血修饰白蛋白的测定方法及检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种缺血修饰白蛋白的测定方法，利用缺血修饰白蛋白钴结合能力减弱的特性，使用化学试剂检测反应体系中的游离钴，通过吸光度变化表示游离钴含量变化，间接表示缺血修饰白蛋白的浓度，检测中所使用的显色剂为2,4‑二巯基嘧啶，用以检测反应体系中的游离钴。本发明所用的显色剂2,4‑二巯基嘧啶稳定性更高，分析灵敏度更高，价格较低，检测结果以游离钴浓度报告，避免采用吸光度报告时由于仪器或试剂性能差别和不稳定导致IMA检测结果吸光度不稳定的问题。本发明还提供一种缺血修饰白蛋白检测试剂盒，包括所述方法所用到的试剂。

技术领域

本发明涉及对人血清中缺血修饰白蛋白进行检测的方法，尤其涉及一种缺血修饰白蛋白的测定方法及检测试剂盒。

背景技术

缺血修饰白蛋白(ischemia modified albumin，IMA)是近年来发现的一种理想的心肌缺血标志物，在早期诊断急性冠状动脉综合症中具有独特的优势。急性冠状动脉综合症(Acute coronary syndromes ACS) 是指冠状动脉粥样硬化斑块脱落，血小板聚集，血栓形成致使冠状动脉狭窄、阻塞，引起心肌缺血以及梗死的病理现象，从临床角度看，涵盖了一组连续进展的病症，包括不稳定心绞痛、非ST段抬高的心肌梗死和ST段抬高的心肌梗死。

人血清白蛋白(HSA)是一种循环蛋白，其氨基末端序列为人类所特有，能与金属钴、铜和镍等离子结合，与其它种属动物白蛋白相比， HSA的金属结合位点更易受生物化学因素的影响而被降解。人血清白蛋白在氧自由基作用下，其氨基末端结构发生改变，导致其与某些外源性金属钴、铜、镍结合能力减弱的白蛋白，称为缺血修饰白蛋白(Ischemiamodified albumin IMA)。

研究人员在寻找冠状动脉综合症(ACS)生化标志物时观察到患者血清白蛋白与外源性Co²⁺结合能力减弱，同时阐明缺血再灌注引起白蛋白改变的机制主要为内皮细胞损伤及细胞外缺氧，酸中毒，自由基损伤，细胞膜能量依赖的钠钾泵破坏和游离Co²⁺增多，这些反应在急性心肌缺血后数分钟内发生。当各种原因引起缺血时，局部血液灌注和供氧减少，组织细胞进行无氧代谢，消耗ATP。同时代谢产物(如乳酸)堆积，导致酸中毒，局部微环境pH下降致使Cu²⁺从循环蛋白的金属结合位点释放，在还原剂如VitC存在时，Cu²⁺→Cu⁺，后者可与氧反应生成氧自由基[O^-]，在超氧化物歧化酶(SOD)的作用下，使其转化为过氧化氢和氧。正常情况下过氧化氢无害，由SOD降解生成水和O₂，当有金属离子存在时，过氧化氢通过Fenton反应形成 [O^-]，后者具有高度活性，导致蛋白、核酸损伤和脂质过氧化。HSA 易受[O^-]损害，使N-末端序列2-4个氨基酸(天冬氨酸-丙氨酸-丝氨酸 -赖氨酸)发生转变形成IMA。也有报道是乙酰化或缺失1-2氨基酸。在这一过程中，游离Cu²⁺具有很高的毒性作用。游离Cu²⁺释放后，血清白蛋白的N-末端序列与其结合，迅速将其清除，当白蛋白在[O^-] 作用下被修饰后，结合Cu²⁺的能力减弱，Cu²⁺从结合位点释放，再次进入[O^-]的形成过程或与正常的白蛋白结合，这就形成了一个链式反应，最终使IMA在缺血数分钟内迅速升高。理想的心肌缺血标志物应具有以下特征：(1)无论是否具有心肌坏死，都能查出心肌缺血，其他器官缺血、炎症或坏死时不增高。(2)缺血早期即可查出，升高程度与缺血程度一致。(3)标志物稳定，有足够的诊断窗口期，12-24 小时内应能恢复至正常，以利于查出再次缺血。

研究表明IMA基本具备理想心肌缺血标志物基本特征，在以下几个方面具有重要价值：

(1)对于因胸痛或不适来就诊的急诊患者进行危险分层，对低危患者有助排除ACS诊断。