[发明专利]一种寨卡病毒的重组基因及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种寨卡病毒的重组基因，该重组基因的DNA序列如SEQ ID NO 1所示。将所述的重组基因插入到商用载体pMD19‑T中得到表达载体，再将病毒穿梭载体VSV‑G克隆所述的表达载体中得到克隆载体，然后所得到的克隆载体与含绿色荧光蛋白报告基因的慢病毒包装核心载体pLV‑eGFP和慢病毒辅助质粒psPAX2共转染人胚胎肾细胞HEK‑293T即得到重组假病毒。由于所述的重组假病毒不仅可以替代天然寨卡病毒进行血清中和抗体滴度的评价，而且可用于制备脑或肾脏的靶向载体。

技术领域

本发明涉及DNA重组技术，具体涉及寨卡病毒的Env基因DNA变构重组，该重组基因可用于制备肾脏靶向载体。

背景技术

Zika病毒(ZIKV)是经蚊虫等媒介传播的黄病毒科(Flaviviridae)，黄病毒属(Flavivirus)病毒。与登革热类似，ZIKV感染可导致轻度或急性发热性疾病，头痛和肌痛。2007年亚太岛爆发后，东南亚，撒哈拉以南非洲地区以及南美洲和中美洲地区出现零星病例。2016年2月，中国卫生部通报了首例输入性ZIKV感染患者。孕妇感染寨卡病毒(Zikavirus，ZIKV)后，病毒穿过胎盘，在胚胎发育过程中特异性侵入皮层神经前期细胞，导致神经细胞死亡，引发婴儿小头症和先天性畸形。ZIKV感染也与成年人的神经系统疾病有关，如吉兰-巴雷综合征，患者失去劳动能力，给家庭和社会造成严重危害。2016年1月WHO宣布ZIKV的爆发和传播已经成为全球紧急公共卫生事件。

由于传染性高，难以获得病原体，从而阻碍了对ZIKV的生物学研究，包括抗病毒药物研究和疫苗开发。假型病毒作为替代方法已经广泛应用于病原体的生物学特征研究，特别是对于难以在体外培养或需要较高生物安全等级设施的病毒。自1996年首次报道慢病毒载体系统以来，基于慢病毒的假型病毒已广泛用于许多鉴定病毒入胞的研究，中和抗体测定，筛选新型宿主细胞受体和抗病毒药物，以及疫苗的开发。ZIKV基因组由编码三个结构蛋白(C，prM/M，E)和七个非结构蛋白(NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A，NS4B，NS5)的单股正链RNA组成，文献报道表明,包膜病毒的表面蛋白在靶细胞的感染中起重要作用，因为它介导病毒体与细胞受体的连接。

外源基因进入机体实质器官的细胞中是基因治疗的基础和关键，在基础研究和临床治疗中，寻找肾脏靶向性病毒载体一直是研究的热点和难点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种寨卡病毒的重组基因，该重组基因所制备的重组假病毒可用于制备脑或肾脏的靶向载体。

本发明解决技术问题的方案如下：

一种寨卡病毒(ZIKV)的重组基因，该重组基因的DNA序列如SEQ ID NO 1所示。

上述重组基因可按SEQ ID NO 1所示序列采用基因合成仪人工合成。

上述重组基因翻译后的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。

一种表达载体，该表达载体是插入有SEQ ID NO 1所示重组基因的pMD19-T载体。

一种重组假病毒制备方法，该方法由以下步骤组成：

(1)将上述表达载体和慢病毒穿梭载体VSV-G分别进行Xho I单酶切以及琼脂糖凝胶电泳后，胶回收小片段和大片段；然后，对VSV-G酶切回收的大片段进行补平及去磷，对上述表达载体酶切回收的小片段进行补平，再将所得到的两个片段采用NEB的T4连接酶连接，得到克隆载体pCMV-ZIKV-Env/VSV-G-TC；

(2)将所得到的克隆载体pCMV-ZIKV-Env/VSV-G-TC与含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的慢病毒包装核心载体pLV-eGFP和慢病毒辅助质粒psPAX2共转染人胚胎肾细胞HEK-293T；共转染48小时后收集培养上清，离心去细胞碎片，即得所述的重组假病毒；其中，