[发明专利]一种橄榄叶提取物的制备方法及应用

说明书

技术领域：

本发明涉及植物成分提取技术领域，具体涉及一种橄榄叶提取物的制备方法及应用。

背景技术：

橄榄，是以“高产、优质、高效”为特征的世界名贵常绿木本油料和果用树种，栽培品种有500种之多，广泛种植的约140种。橄榄生长能力旺盛，耐旱、喜光，主要分布在欧洲地中海沿岸国家和美洲加州地区，后传入我国。长期以来，主要利用橄榄鲜果加工成为素有“植物油皇后”之称的橄榄油。

现代生物技术分析表明，橄榄叶中含有大量的生物活性物质，其抗氧化活性成分较橄榄果更为突出，尤其是裂环烯醚萜类(橄榄苦苷为主要成分)主要存在于欧洲橄榄叶中。

橄榄苦苷具有抗菌、抗病毒活性和极强的抗氧化能力，同时具有降血压、降血糖和抗癌等作用。目前，已报道的橄榄苦苷提取方法很多，但产品的纯度和得率都很低，并且由于橄榄苦苷易被氧化，对温度和光线较敏感，吸湿性很强，而且不易结晶，所以高纯度的橄榄苦苷不易制备得到。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于提供一种产品提取率高、纯度好且操作环保性强的橄榄叶提取物的制备方法。

本发明所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现：

一种橄榄叶提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)预处理：采收新鲜橄榄叶，经清洗漂洗后注入消毒液，使消毒液完全浸润橄榄叶，消毒液温度保持在35-40℃，搅拌5min后静置5min，继续搅拌5min后静置5min，再次搅拌5min后静置5min，排尽消毒液，并用清洗漂洗，即完成橄榄叶的预处理；

(2)一级提取：向经预处理的橄榄叶中注入水和复合酶，并于35-40℃保温搅拌，1-3h后加热至回流状态保温搅拌5-10min，即得橄榄叶混合物；所述复合酶由质量比2:1的绿色木霉和胰蛋白酶构成；

(3)二级提取：向一级提取所得橄榄叶混合物中加入无水乙醇，调整二级提取溶剂为70-75％的乙醇溶液，加热至回流状态保温搅拌3-5h，过滤，即得提取液；

(4)浓缩、纯化：将所得提取液减压浓缩以回收乙醇，待乙醇回收结束后加入等量水恢复至原体积，过滤，所得滤液经大孔吸附树脂HPD-400A富集一次，再用45％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液经减压浓缩制成含水量15-20％的浸膏，自然冷却至室温后将浸膏送入冷冻干燥机中，干燥所得固体经超微粉碎机制成微粉，即得橄榄叶提取物。

所述步骤(1)中橄榄叶与消毒液的质量比为10:10-30，消毒液中消毒剂的浓度在50-100mg/L。

所述消毒剂选自二氧化氯或盐酸聚六亚甲基胍。

所述步骤(2)中橄榄叶、水与复合酶的质量比为10:30-50:0.05-0.1。

所述消毒剂由如下重量的原料制成：泊洛沙姆407 5-10g、韭菜苔5-10g、秋葵叶5-10g、苋根1-5g、茅草根1-5g、茶耳1-5g、野生紫苏0.5-3g、芳樟精油0.01-0.05g，其制备方法为：将韭菜苔、秋葵叶、苋根、茅草根、茶耳和野生紫苏加入2倍总重的水中，并加热至50-60℃保温搅拌30min，再利用功率1.5kW磨浆机磨浆30min，过滤，向所得滤液中加入泊洛沙姆407和芳樟精油，充分混合后送入冷冻干燥机中，干燥所得固体经超微粉碎机制成微粉，即得水性消毒剂。

所述橄榄叶提取物在制备眼霜中的应用。

本发明的有益效果是：

(1)本发明在橄榄叶预处理时使用了消毒剂，消毒剂的使用不仅能对橄榄叶起到很好地消毒作用，有效杀灭橄榄叶上附着的细菌和病菌，还能在消毒结束后直接采用少量水即可彻底清除；同时消毒剂包含两种，一种是常规消毒剂二氧化氯或盐酸聚六亚甲基胍，另一种是自制消毒剂，自制消毒剂中所采用的植物成分组合遵循中药的君臣佐使配伍关系，对细菌和病菌起到快速杀灭的效果，从而提高所制橄榄叶提取物的使用安全性，并保证后续复合酶提取时复合酶的活力，防止细菌和病菌的存在影响复合酶的提取效果。

(2)本发明采用两级提取方式，一级提取采用复合酶来快速破坏橄榄叶的细胞壁和细胞膜，加快橄榄苦苷的浸出速度；复合酶经失活处理后再通过二级提取来进一步加快橄榄苦苷的浸出速度，缩短提取时间，提高橄榄苦苷的提取率；

(3)本发明以大孔吸附树脂HPD-400A作为纯化树脂，在有效减少橄榄苦苷损失量的基础上大大提高橄榄苦苷的纯度，并且大孔吸附树脂HPD-400A经再生后可循环使用，避免一次性使用对环境造成的严重污染；