[发明专利]一种人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白及其应用

说明书

本发明涉及一种人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白及其应用，将大量肿瘤患者作为研究病例，对病例进行基因检测并进行分析，确定出人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶的突变蛋白，根据该人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为人体肿瘤的基因诊断提供的指引作用，实现肿瘤的早诊断、早发现和相关治疗。

技术领域

本发明涉及一种基因工程领域，尤其涉及一种人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白及其应用。

背景技术

丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(serine/threonine-protein phosphatase)是一种可以特异地催化蛋白质底物上的丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化，从而调节该蛋白质功能的酶。

蛋白磷酸酶对其他蛋白的磷酸化是信息传递的基础,真核细胞中蛋白质的磷酸化与去磷酸化是信号传递与整合的一个重要机制。细胞接受外界信号,使一些调控第二信使的蛋白磷酸化,由此将信息通过第二信使传至蛋白磷酸酶,这些蛋白磷酸酶又进一步使其底物可逆性磷酸化,引起细胞的应答反应,这与细胞生长的调节、增殖有密切关系,可能是正常细胞和肿瘤细胞相互转化的关键环节。因此，对人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变的检测对判断人体的是否具有肿瘤有一定的指引作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白及其应用。

本发明技术方案包括：

第一方面，提供一种人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

第二方面，提供一种人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

第三方面，提供一种基因芯片，包括：固相载体和固定在该载体上的核苷酸探针；所述核苷酸探针根据所述人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白的核苷酸序列，与人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶正常蛋白的核苷酸序列的比对结果确定。

优选地，所述核苷酸探针为SEQ ID NO:3所示的碱基序列。

第四方面，提供一种特异性识别人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白的单克隆抗体，其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一种用于检测人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白的抗体的ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括：包被有上述单克隆抗体的ELISA酶标板、酶标二抗、检测对象的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶蛋白、样品稀释液、包被缓冲液、ELISA酶标板洗涤液、显色液和终止液。

优选地，所述酶标二抗为稀释的HRP辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一种基于上述任一所述ELISA试剂盒检测人的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶突变蛋白的抗体的方法，包括：

a、使用所述包被缓冲液对上述单克隆抗体进行稀释，并将稀释后的所述单克隆抗体加样至ELISA酶标板的孔中，并室温孵育；

b、使用所述样品稀释液将检测对象的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶蛋白稀释成不同浓度梯度，并将不同浓度梯度的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶蛋白分别加样至ELISA酶标板的孔中，并室温孵育；

c、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；

d、加入所述酶标二抗，并室温孵育；

e、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；

f、加入所述显色液，室温避光孵育，加入所述终止液终止反应；

g、在酶标仪上450nm测定OD值。