[发明专利]磁微粒化学发光法测定地高辛含量的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种磁微粒化学发光法测定人血清中地高辛含量的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括生物素化地高辛抗原衍生物、抗体酶标试剂、酶标地高辛抗原衍生物、生物素化地高辛鼠单抗和校准品；

所述试剂盒中主要组分按照如下制备方法制得：一、地高辛抗原衍生物制备过程:

1)、将地高辛和琥珀酸酐分别用DMF缓冲液溶解，得到地高辛-DMF溶液和琥珀酸酐-DMF溶液；

2)、将地高辛-DMF溶液加入琥珀酸酐-DMF溶液中，65℃反应4～6h；加入三丁胺和氯甲酸异丁酯，室温反应20～40min，得到地高辛-琥珀酸酐的DMF溶液；加入赖氨酸溶液，室温反应2～4h；

3)、将反应物用水透析过夜，调节pH析出沉淀，将沉淀放置室温0.5～2h，然后在4℃放置2～4h，4℃离心10-15min，用Na2CO3缓冲液溶解沉淀配置成地高辛抗原衍生物的溶液；

二、生物素化地高辛抗原衍生物制备过程:

将生物素-NHS用DMSO进行溶解后，按照地高辛抗原衍生物与生物素-NHS摩尔比为1:18～22加入步骤一所得的地高辛抗原衍生物，室温反应2h；用透析袋透析反应产物，将透析液稀释至工作液浓度；

三、抗体酶标试剂制备过程：

将地高辛鼠单抗和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2-8℃反应14～20h小时；将反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰进行混合后用缓冲液将配置成工作液浓度；

四、酶标地高辛抗原衍生物制备过程：

将地高辛抗原衍生物和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2-8℃反应14～20h小时；

将反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰进行混合后用缓冲液将配置成工作液浓度；

五、生物素化地高辛鼠单抗制备过程：

1)将生物素-NHS，用DMSO进行溶解得到DMSO溶解的生物素，加入地高辛鼠单抗，充分混匀后室温反应2h；透析后将透析液稀释至工作液浓度；

所述步骤三中地高辛鼠单采用0.1*的PBS进行透析，然后用2IT进行活化，得到活化后的抗体；所述步骤四中地高辛抗原衍生物采用0.1*的PBS进行透析，然后用2IT进行活化，得到活化后的抗体；所述步骤三和四中的碱性磷酸酶用SMCC进行活化，得到活化后的碱性磷酸酶。

2.一种如权利要求1所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取样本15ul、生物素化地高辛抗原衍生物30ul和抗体酶标试30ul，孵育15min；

2)向1)中加入磁珠30ul，孵育5min；

3)磁分离2min，去上清；

4)洗涤3次，每次300ul洗液；

5)加入底物200ul，测值。

3.一种如权利要求1所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取样本15ul、酶标地高辛抗原衍生物30ul和生物素化地高辛鼠单抗30ul，孵育15min

2)向1)中加入磁珠30ul，孵育5min；

3)磁分离2min，去上清；

4)洗涤3次，每次300ul洗液；

5)加入底物200ul，测值。