[发明专利]多特异性FAB融合蛋白及其使用方法

权利要求书

1.多特异性Fab融合蛋白，其包含：能与CD3ε的N端结合的Fab片段；与所述Fab片段中VL的N端连接的融合部分A，和与所述Fab片段中VH的N端连接的融合部分B；

a. 所述Fab片段包含：

i. 免疫球蛋白轻链可变区(VL)和免疫球蛋白轻链恒定区(CL)，所述免疫球蛋白轻链可变区包含SEQ ID NO: 26-28所示的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列，以及

ii. 免疫球蛋白重链可变区(VH)和免疫球蛋白重链恒定区1 (CH1)，所述免疫球蛋白重链可变区包含SEQ ID NO: 23-25所示的CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列；

其中所述CL区和CH1区任选通过二硫键连接；

b. 所述融合部分A的C端与所述VL结构域的N末端共价连接，所述融合部分B的C端与所述VH结构域的N末端共价连接；

e. 任选地，第一接头位于所述融合部分A和所述VL结构域之间，且任选地，第二接头位于所述融合部分B和所述VH结构域之间；并且

g. 其中：

所述融合部分A包含第一抗原结合片段，所述融合部分B包含第二抗原结合片段，其中所述第一抗原结合片段和第二抗原结合片段各自独立地：1)包含分别如SEQ ID Nos: 139-144所示的VHCDR和VLCDR；2)包含分别如SEQ ID Nos: 145-150所示的VHCDR和VLCDR；3)包含SEQ ID Nos: 78、88和94的任一氨基酸序列所示的scFv中存在的VH与VL；或4)包含选自SEQ ID NO: 78、88和94所示的任一氨基酸序列的scFv，其中所述第一抗原结合片段和第二抗原结合片段分别能与EpCAM结合。

2.如权利要求1所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述Fab片段能结合CD3ε的第1-27位氨基酸内的表位。

3.如权利要求1或2所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述Fab片段与非人灵长类CD3ε交叉反应。

4.如权利要求1所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述Fab片段的所述VH选自SEQ IDNO: 34、38、42、46、50和54所示的任一氨基酸序列。

5.如权利要求1所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述Fab片段的VL选自SEQ ID NO:56、58、62、66和70所示的任一氨基酸序列。

6.如权利要求1所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述免疫球蛋白重链恒定区类型选自α、δ、ε、γ和μ。

7.如权利要求1所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述免疫球蛋白重链来源于IgG抗体。

8.如权利要求7所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述IgG抗体的亚型选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。

9.如权利要求1所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述免疫球蛋白轻链VL和CL选自免疫球蛋白κ轻链和免疫球蛋白λ轻链。

10.如权利要求1所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述融合部分A包含含有scFv抗原结合结构域的第一抗原结合片段。

11.如权利要求1所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述第一接头或所述第二接头的长度为1-20个氨基酸。

12.如权利要求1所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述第一接头或所述第二接头包含GlyArgAla。

13.如权利要求1所述的多特异性Fab融合蛋白，其中所述Fab是人源化的。