[发明专利]用于大肠癌诊断的尿液microRNA生物标志物、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于大肠癌诊断的试剂盒，其特征在于包含用于对患者尿液中microRNA hsa-miR-92b-5p、hsa-miR-4706、hsa-miR-3665、hsa-miR-3652、hsa-miR-3714和hsa-miR-550a-3-5p的组合的表达量进行PCR 检测的microRNA引物组和microRNA探针的组合，所述microRNA引物组包括反转录引物、PCR前引物和PCR后引物；

所述hsa-miR-92b-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述hsa-miR-4706的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述hsa-miR-3665的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述hsa-miR-3652的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述hsa-miR-3714的核苷酸序列如SEQ IDNO：5所示，所述hsa-miR-550a-3-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；

所述hsa-miR-92b-5p的反转录引物序列如SEQ ID NO：7所示，PCR前引物序列如SEQ IDNO：13所示，PCR后引物序列如SEQ ID NO：19所示；所述hsa-miR-4706的反转录引物序列如SEQ ID NO：8所示，PCR前引物序列如SEQ ID NO：14所示，PCR后引物序列如SEQ ID NO：19所示；所述hsa-miR-3665的反转录引物序列如SEQ ID NO：9所示，PCR前引物序列如SEQ IDNO：15所示，PCR后引物序列如SEQ ID NO：19所示；所述hsa-miR-3652的反转录引物序列如SEQ ID NO：10所示，PCR前引物序列如SEQ ID NO：16所示，定量PCR后引物序列如SEQ IDNO：19所示；所述hsa-miR-3714的反转录引物序列如SEQ ID NO：11所示，PCR前引物序列如SEQ ID NO：17所示，PCR后引物序列如SEQ ID NO：19所示；所述hsa-miR-550a-3-5p的反转录引物序列如SEQ ID NO：12所示，PCR前引物序列如SEQ ID NO：18所示，PCR后引物序列如SEQ ID NO：19所示；所述microRNA探针的序列如SEQ ID NO：20所示。

2.根据权利要求1所述的用于大肠癌诊断的试剂盒，其特征在于还包括qPCR扩增检测的常规组件，所述qPCR扩增检测的常规组件包括逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl₂、dd H₂O、荧光染料、Taq酶、标准品和对照物。

3.检测大肠癌诊断的microRNA生物标志物的引物组或探针在制备用于检测受试者中存在大肠癌的体外方法中的产品中的用途，所述的方法包括：

测定来源于受试者的尿液的生物标志物的表达水平以获得测定值，所述的生物标志物是microRNA hsa-miR-92b-5p、hsa-miR-4706、hsa-miR-3665、hsa-miR-3652、hsa-miR-3714和hsa-miR-550a-3-5p的组合；

将所述的测定值与参考值比较，若测定值高于参考值，则确定受试者患有大肠癌。