[发明专利]一种用于HBsAg纯化的药用级XAD-4树脂柱的处理方法

说明书

背景技术

本发明涉及一种用于HBsAg纯化的药用级XAD-4树脂柱的处理方法，属于生物制药技术。

背景技术

XAD-4树脂是一种非极性大孔聚苯乙烯吸附树脂，常用于从工艺水中和极性溶剂中除去小分子有机物。在HBsAg纯化工艺中，需要使用表面活性剂-曲通改变分子表面张力来分离不同的组分，后续工艺中利用XAD-4树脂对曲通的特异吸附，达到去除曲通的目的。可用于纯化HBsAg药用级成品XAD-4树脂柱，目前主要使用市售的药用级成品XAD-4树脂柱，不仅价格高昂，且难以再生重复利用，生产成本很高，不利于HBsAg的大规模生产。

发明内容

本发明的目的在于为了解决现有技术存在的缺点，而提供一种用于HBsAg纯化的药用级XAD-4树脂柱的处理方法。本发明采用工业级散装XAD-4树脂为原料，按特定方法和流程处理后，可达到药用级XAD-4树脂柱的要求，具有很强的曲通吸附能力，且蛋白吸附率小，且其成本相对于药用级成品XAD-4树脂柱来说极其低廉，具有较好的经济效益。

为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种用于HBsAg纯化的药用级XAD-4树脂柱的处理方法，包括以下步骤：

(1)将XAD-4树脂用注射用水清洗去掉悬浮颗粒后装入柱筒；

(2)注射用水冲洗0.5-1.5小时；

(3)体积分数为20％的乙醇溶液冲洗1-3小时；

(4)注射用水冲洗0.5-1.5小时；

(5)摩尔浓度为0.1mol/L的HCl溶液冲洗1-3小时；

(6)注射用水冲洗0.5-1.5小时；

(7)摩尔浓度为0.1mol/L的NaOH溶液冲洗1-3小时；

(8)摩尔浓度为0.1mol/L的NaOH溶液保存6小时以上；

(9)使用前用6.2mmol/L的磷酸盐缓冲溶液冲洗3-5小时。

所述处理方法冲洗时柱筒垂直放置，冲洗液下进上出，流量控制在250-300ml/min；如果同时处理多根XAD-4树脂柱时应串联，最多可串联5根XAD-4树脂柱。

所述XAD-4树脂为工业级散装XAD-4树脂。

与现有技术相比，本发明具有以下的有益效果：

本发明方法处理后的XAD-4树脂柱可达到药用级的要求，应用本发明方法处理后的XAD-4树脂柱用于纯化HBsAg时，具有很强的曲通吸附能力，且蛋白吸附率小，在去除曲通的能力和蛋白吸附率均达到甚至略优于目前市售的药用级成品XAD-4树脂柱，且其制备成本远低于市售的药用级成品XAD-4树脂柱的价格，具有较好的经济效益。

具体实施例方式

下列实施例旨在进一步举例更具体地描述本发明的具体实施方式，但是应理解所述实施例仅为了说明本发明，而不是以任何方式限制本发明的范围。

实施例

一、装柱及清洗

1.材料：

XAD-4树脂柱筒：由本公司开发和设计，材质为不锈钢，拆卸和组装快速方便，柱筒容量1L。

XAD-4树脂：市售工业级散装XAD-4树脂

2.制备方法

将市售工业级散装XAD-4树脂用注射用水清洗去掉悬浮颗粒后装入柱筒，再依次采用以下试剂清洗：

(1)注射用水冲洗1小时；

(2)20％乙醇溶液冲洗2小时；

(3)注射用水冲洗1小时；

(4)0.1mol/L的HCl溶液冲洗2小时；

(5)注射用水冲洗1小时；

(6)0.1mol/L的NaOH溶液冲洗2小时；

(7)0.1mol/L的NaOH溶液保存6小时以上；

(8)使用前用6.2mmol/L的磷酸盐缓冲溶液冲洗4小时。

冲洗时柱筒垂直放置，冲洗液下进上出，流量300ml/min；如果同时处理多根XAD-4树脂柱时应串联，为保证清洗效果最多可串联5根XAD-4树脂柱。

二、清洗效果

按以下操作制作市售的工业级散装XAD-4树脂浸出物、按本发明方法制备的XAD-4树脂柱浸出物、市售的药用级成品XAD-4树脂柱浸出物，检测这三种浸出物的DVB(Divinlybenzene，二乙烯苯)残余量和TCO(色谱分析化学物)。