[发明专利]利用光合放氧电子分离快速筛检核诱变固碳藻株的方法

权利要求书

1.一种利用光合放氧电子分离快速筛检核诱变固碳藻株的方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）将处于对数生长期的微藻置于钴⁶⁰-γ射线核辐照条件下进行诱变，然后静置恢复一个月；具体包括：

取20毫升处于对数生长期的微藻，装入容量50毫升的锥形瓶，置于剂量500~5000GY的钴⁶⁰-γ射线核辐照条件下进行诱变；然后将核诱变后的微藻突变体静置于20℃恒温箱进行一个月的恢复，全天24小时控制光照强度为1000Lux；

（2）取恢复生长后的微藻接种至由微藻培养基制成的琼脂板中进行单个藻株纯化培养，然后以96孔板接种单株纯化后存活的藻株，再取96个试管分别一一对应接种96孔板的每个孔藻液进行扩大培养，各培养周期均为7天；具体包括：

取恢复生长后的微藻溶液0.2微升，接种至由微藻培养基制成的琼脂板中进行单个藻株纯化培养，培养周期为7天；将96孔板每个孔中加入微藻培养基0.3毫升，然后接种单株纯化后存活的藻株，培养周期为7天；再取96个试管分别加入微藻培养基5毫升，然后一一对应接种96孔板中的每个孔藻液进行扩大培养，培养周期为7天；

（3）在96个试管中分别采集1毫升经扩大培养的微藻样品，置于溶氧测试仪的样品槽内，控制溶氧测试仪的光照强度，测量样品槽内由微藻光合作用释放的氧气溶解浓度，进而获得微藻光合放氧速率数据；具体包括：

在96个试管中分别采集1毫升经扩大培养的微藻样品，置于溶氧测试仪的样品槽内，在黑暗条件下持续通入氩气直至测试出藻液中的氧气溶解浓度为零；然后控制溶氧测试仪的光照强度为350μmol (m²·s)^-1，测量样品槽内由微藻光合作用释放的氧气溶解浓度；计算微藻光合放氧速率：R_氧气=(C₂-C₁)/(t₂-t₁)，其中C₂为t₂=120秒时的氧气溶解浓度，C₁为t₁=60秒时的氧气溶解浓度；

（4）在96个试管中分别采集50微升经扩大培养的微藻样品，置于快速重复荧光仪的样品槽内，对微藻样品进行光束刺激实验，进而获得微藻光合作用反应中心的叶绿素电子分离效率数据；具体包括：

在96个试管中分别采集50微升经扩大培养的微藻样品，置于快速重复荧光仪的样品槽内，对微藻样品进行6000个光束的刺激实验；每一个小周期10毫秒的光束刺激的控制策略为：控制一束光照时间为0.05毫秒，然后黑暗时间为9.95毫秒；重复50次小周期的光束刺激共0.5秒，然后再控制黑暗时间0.5秒；以上共1秒的实验时间称为一个大周期，重复此大周期实验120次，共耗时120秒；

计算微藻光合作用反应中心的叶绿素电子分离效率方法：将第120个大周期实验时的共50个小周期光束刺激时获得的叶绿素荧光参数Fv/Fm取平均值，即为叶绿素电子分离效率；

（5）分别选取光合放氧速率最高的前10名的藻株，以及叶绿素电子分离效率最高的前10名的藻株，将同时能列入两个筛选结果中的藻株作为高生长固碳速率的优良藻株。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的微藻是小球藻、微拟球藻或螺旋藻中的任意一种。