[发明专利]一种用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法

权利要求书

1.一种用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：所述方法是通过监测牛PPARγ基因的表达量，根据牛PPARγ基因的表达量与肌内脂肪中甘油三酯含量成正相关的特征，通过荧光定量实时PCR技术度量牛肉中甘油三酯的含量，从而实现牛肉肌内脂肪中甘油三酯的检测；

该方法包括如下步骤：

1)从被检测的牛肉组织中提取总RNA，再通过反转录反应制备cDNA样品；

2)将制备的cDNA样品进行荧光定量实时PCR检测，反应条件采用两步法PCR扩增标准程序；

3)在ABI7500定量PCR仪上进行检测，荧光信号在每个循环结束时检测，得到牛PPARγ基因的原始表达量；

4)将牛PPARγ基因的原始表达量经反正弦转换后，采用Statistics软件对实验数据和其他数据进行t检验，通过数据分析即检测到牛肉肌内脂肪中甘油三酯的含量。

2.根据权利要求1所述的用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：步骤1)中所述反转录反应采用TaKaRa反转录试剂盒标准流程进行。

3.根据权利要求1所述的用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：步骤2)中所述荧光定量实时PCR检测过程的反应体系为：SYBR10ul，Dye0.4ul，上下游引物各0.25ul，cDNA模版1ul，ddH2O8.1ul。

4.根据权利要求3所述的用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：所述上游引物的序列为：CCTGTTCCGTGCTGTGAT；所述下游引物的序列为：AAAGGCATGGGAGTGGTC。

5.根据权利要求1所述的用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：步骤2)中所述反应条件为预变性95℃4min，95℃5s，61℃15s，72℃30s，共35个循环。

6.根据权利要求1所述的用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：步骤2)中所述荧光定量实时PCR检测过程采用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参基因，其与目的基因的扩增程序一致，退火温度为61℃。

7.根据权利要求1-6中任一权利要求所述的用PPARγ基因评定牛肌内脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：评定牛肌内脂肪中的甘油三酯含量的基因还包括PPARα、 PPARβ、HMGCS2、APOA1、APOA2、APOC3、ME1、SCD1、SCD5、CYP7A1、NR1H3、CYP8B1、CYP27A1、 CYP8B1、DBI、FABP1、FABP3、SLC27A1、SLC27A4、CD36、LPL、OLR1、ACSL3、ACSL6、ACSL5、 ACSBG1、ACSBG2、ACSL4A、ACSL1、EHHADH、CYP4A22、ACAA1、SCP2、ACOX3、ACOX1、ACOX2、CPT1A、 CPT1B、CPT1C、CPT2、ACADL、ACADM、ANGPTL4、FABP4、SORBS1、PLIN2、PLIN4、PLIN1、PLIN5、 APIPOQ、MMP1、FAS。

8.如权利要求1-6中任一权利要求所述的PPARγ基因在牛肌内脂肪中甘油三酯的动态监测的应用。