[发明专利]一种玉米双单倍体的制备方法

说明书

本发明公开了一种玉米双单倍体的制备方法。本发明基于单倍体幼胚鉴别技术、单倍体幼胚加倍技术和幼胚直接成苗技术，建立了单倍体组培鉴别与加倍技术体系，提供了一种新的快速获得玉米双单倍体的方法，本发明的方法具有快速、高效和易规模化操作的特点。与单倍体加倍常规方法相比，大大缩短了时间，且组培加倍更易规模化操作，适合未来单倍体工程化育种的要求，在未来单倍体育种中具有较大应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种玉米双单倍体(DH)的制备方法。

背景技术

玉米是一种利用杂种优势的模式作物，其中最为关键的环节是纯系选育。常规的玉米自交系的选育需要经过多代的自交选择，因此选育一个品种往往需要数年的时间；而且理论上讲，即使自交n(n∝∞)代，基因型也不能达到100％的完全纯合状态。利用孤雌生殖诱导系诱导产生单倍体并进行人工加倍，只需两代就可以得到100％纯合的自交系，与常规方法相比不仅大大缩短育种进程，而且节约大量的人力、物力和财力。

单倍体加倍常用的方法有自然加倍和化学加倍。自然加倍的频率往往比较低，而且易受环境和基因型的影响，远远不能满足单倍体育种技术规模化应用的需求。化学加倍是目前最常用的单倍体加倍方法，加倍试剂一般是可以抑制细胞有丝分裂过程中纺锤丝的形成，从而使复制的染色体不发生分离，形成染色体加倍的细胞。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种玉米双单倍体(DH)的制备方法。

本发明提供的玉米双单倍体的制备方法包括如下步骤：将玉米孤雌生殖诱导系诱导的幼胚在含有加倍试剂的培养基中进行加倍培养，得到加倍后单倍体幼胚；将所述加倍后单倍体幼胚进行培养成苗，得到所述玉米双单倍体；

所述加倍试剂为拿草特、秋水仙素或甲基胺草磷。

上述方法中，

所述甲基胺草磷在所述含有加倍试剂的培养基中的浓度为1-9μmol/L；所述甲基胺草磷在所述含有加倍试剂的培养基中的浓度优选为9μmol/L；

所述拿草特在所述含有加倍试剂的培养基中的浓度为1-10μmol/L；所述拿草特在所述含有加倍试剂的培养基中的浓度优选为5μmol/L；

所述秋水仙素在所述含有加倍试剂的培养基中的质量分数为0.005-0.03％；所述秋水仙素在所述含有加倍试剂的培养基中的质量分数优选为0.03％。

上述方法中，所述含有加倍试剂的培养基是将加倍试剂、MS盐、蔗糖、吐温80、二甲基亚砜和水混匀得到的；

所述MS盐在所述含有加倍试剂的培养基中的浓度为3.0g/L；

所述蔗糖在所述含有加倍试剂的培养基中的浓度为30g/L；

所述吐温80在所述含有加倍试剂的培养基中的质量分数为0.1％；

所述二甲基亚砜在所述含有加倍试剂的培养基中的质量分数为2％；

所述含有加倍试剂的培养基的pH为5.8。

上述方法中，所述加倍后单倍体幼胚在MS培养基中进行培养成苗；所述MS培养基优选为1/2MS培养基，所述1/2MS培养基是将MS盐、蔗糖、琼脂和水混匀得到的；

所述MS盐在所述1/2MS培养基中的浓度为1.5g/L；

所述蔗糖在所述1/2MS培养基中的浓度为30g/L；

所述琼脂在所述1/2MS培养基中的浓度为7.5g/L；

所述1/2MS培养基的pH为5.8。

上述方法中，所述加倍培养的时间为24-72h；所述加倍培养的时间优选为48h。