[发明专利]用于构建猴子BCR文库的成套试剂与方法

说明书

本发明公开了用于构建猴子BCR文库的成套试剂与方法。本发明公开的构建猴子BCR文库的成套试剂为成套试剂A或成套试剂B；成套试剂A由成套试剂A1与成套试剂A2组成，成套试剂A1为序列表中序列1‑7所示的七条单链DNA，成套试剂A2为在序列表中序列8‑17的5′端均标记生物素的十条单链DNA；成套试剂B由成套试剂B1与成套试剂B2组成，成套试剂B1为序列表中序列18‑24所示的七条单链DNA，成套试剂B2为在序列表中序列25‑34的5′端均标记生物素的十条单链DNA。利用本发明的成套试剂构建的猴子BCR文库覆盖度高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，用于构建猴子BCR文库的成套试剂与方法。

背景技术

获得性免疫又称为特异性免疫，是在抗原刺激下，机体产生的自我保护系统。这个系统主要由淋巴细胞构成，在抗原刺激下，淋巴细胞发生特异性的扩增，进而发挥生理作用。其中，淋巴细胞参与抗原识别的分子，在T、B淋巴细胞上分别是T细胞抗原识别分子(TCR)、B细胞抗原识别分子(BCR)。在人体内，TCR是由异源二聚体分子构成的，主要有αβ型和γδ型，其中，外周循环系统中，超过95％的TCR是属于αβ型。与此同时，这种二聚体组合也具有多样性，目前，已知的种类约2X10⁷。而上述的多样性由其基因决定，主要是染色体V\D\J基因区域存在复等位基因以及缺失和插入现象。在这一复杂基因区域中，有一段基因位置是高可变区，是主要的抗原决定区域，它由部分V\J区和全部的D区构成，被称为互补决定区3(CDR3)。

B细胞受体是表达在B细胞表面的抗原识别分子，同时，它也能够被释放入外周系统，是主要的体液免疫分子。BCR的单体结构，主要是有两条轻链和两条重链所构成。与TCR类似，它也存在一段可变区，分别被称为互补决定区1、2、3。与TCR需要主要组织相容性物质(MHC)呈递抗原不同，BCR能够直接识别抗原，并通过中和等作用，保护机体。

而上述两种分子其多样性来源于其基因水平上的多样性，尤其是BCR，还存在着体突变(一种在B细胞发育成熟后，在扩增过程发生的基因水平的突变)。因此，研究机体的TCR和BCR序列，有助于进一步发现获得性免疫系统的功能，更加精准地诊断以及治疗疾病，有助于促进治疗手段和药物开发。

随着下一代测序技术(NGS)的出现和发展，能够高通量的检测TCR\BCR的序列，建立TCR\BCR库，并展开相关的研究，而这种技术被统称为免疫组库技术。

猴子是一种常用的动物模型，它被长期用于多种人类疾病的研究，并且，由于其机体构成与人类的相似性，也常被用于人类获得性免疫系统的研究。于1992年，GeneLevinson et al.等，通过RT-PCR和克隆的方法，在恒河猴的外周血中发现了23种TRB重排。尽管在后其研究中，检测到的序列在增加，但是，尚不满足TCR\BCR库检测的需要。目前，已有对猴子B细胞BCR建库的方法，该方法中采用5’RACE方法，在收集恒河猴外周血单个核细胞后，提取RNA，加入设计的反转录序列，从mRNA 3’端反转录至5’端，之后，通过在引物中加入测序接头PGM，分别从5’RACE和已知序列处扩增cDNA。该方法将3’端引物设计在constant区域上游较远处，PCR产物较长，达到600-800bp，对测序处理有较大难度；设计的引物仅能覆盖IgG，无法用于其他免疫球蛋白CDR3区域的检测；另外，该方法适用于454测序平台，在illumina测序平台上的使用尚需验证。因此，目前急需开发一种新的方法用于猴子免疫系统的高通量测序评估系统。

发明内容

本发明的目的是提供可用于构建猴子BCR文库的成套试剂以及构建猴子BCR文库的方法。

本发明首先提供的用于构建猴子BCR文库的成套试剂(记为成套试剂甲)，为名称分别为成套试剂A或成套试剂B的成套试剂；

所述成套试剂A包括名称为成套试剂A1的成套试剂；所述成套试剂A1由名称分别为成套试剂A11和成套试剂A12的成套试剂组成；