[发明专利]一种鸽痘、鸽衣原体和鸽疱疹病毒三重PCR诊断试剂盒及其检测方法

说明书

本发明提供了一种鸽痘、鸽衣原体和鸽疱疹病毒三重PCR诊断试剂盒，包括裂解液、扩增反应混合液、阴性对照和阳性对照；其中，裂解液的成分为DNAiso Reagent；扩增反应混合液包含灭菌三蒸水、PCR Buffer、dNTP、POX‑F上游引物、POX‑R下游引物、CPS‑F上游引物、CPS‑R下游引物、PiHV‑F上游引物、PiHV‑R下游引物和rTaq DNA聚合酶；阴性对照为灭菌三蒸水；阳性对照为鸽痘、鸽衣原体和鸽疱疹病毒阳性质粒混合物。该试剂盒灵敏度高、特异性好、稳定性高、结果直观，其检测方法易于操作，能大幅缩短检测时间，为临床控制鸽痘、鸽衣原体与鸽疱疹病毒感染提供有力的技术手段。

技术领域

本发明涉及动物医学动物疫病分子生物学诊断领域，具体涉及一种鸽痘、鸽衣原体和鸽疱疹病毒三重PCR诊断试剂盒及其检测方法。

背景技术

鸽痘(Pigeonpox，POX)是由鸽痘病毒引起的鸽的病毒性传染病。临床分为皮肤型和黏膜型，本病毒主要通过皮肤或粘膜的伤口侵入体内，传染媒介是某些吸血昆虫尤其是蚊子。其特征是体表无羽毛部位皮肤出现散在的、结节状的痘疹(皮肤型)，或上呼吸道、嚎角、口腔、咽喉和食道茹膜出现形成一层黄白色干酪样伪膜(黏膜型)，因而影响运动、吞咽、呼吸，极易造成患病鸽因饥饿或窒息而死亡。

鸽衣原体病是由鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)感染鸽引起不同征候群的一种接触性传染病，临床上以肺炎、心包炎、气囊炎、结膜炎为特征，又称单眼伤风，是危害养鸽业比较严重的一种传染病。

鸽疱疹病毒(Pigeon herpesvirus,PiHV)属于禽疱疹病毒科甲型疱疹病毒亚科马立克氏病毒属成员。自然感染鸽临床表现为厌食、精神不振，以结膜炎和鼻炎为特征。剖检可见上呼吸道发炎，肝脏、脾脏、肾脏及胰脏坏死，肝脏表面可见小的坏死点。疱疹病毒对养鸽业造成较为严重的经济损失。

PCR技术在动物疫病快速诊断中得到了广泛应用，在鸽病诊断上也有报道，但都是进行单个传染病诊断，在检测时效和经济成本上仍有很大的提升空间。目前尚未有诊断鸽痘病毒、鸽衣原体的试剂盒，以及鸽痘病毒、鸽衣原体与鸽疱疹病毒三重PCR诊断试剂盒，临床上无法快速诊断以上三种病毒，三种病毒的检测周期长、成本高。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种鸽痘、鸽衣原体和鸽疱疹病毒三重PCR诊断试剂盒及其检测方法，该试剂盒灵敏度高、特异性好、稳定性高、结果直观，其检测方法易于操作、方便快捷，能大幅缩短检测时间，为临床控制鸽痘、鸽衣原体和鸽疱疹病毒感染提供有力的技术手段。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现。

(一)一种鸽痘、鸽衣原体和鸽疱疹病毒三重PCR诊断试剂盒，包括裂解液、扩增反应混合液、阴性对照和阳性对照；其中，所述裂解液的成分为DNAiso Reagent；所述扩增反应混合液包含灭菌三蒸水、10×PCR Buffer、dNTP、POX-F上游引物、POX-R下游引物、CPS-F上游引物、CPS-R下游引物、PiHV-F上游引物、PiHV-R下游引物和rTaq DNA聚合酶；所述阴性对照为灭菌三蒸水；所述阳性对照为鸽痘、鸽衣原体和鸽疱疹病毒阳性质粒混合物。

优选的，所述POX-F上游引物的序列为：5’-GACTCTAGTCTACACCACTGCCT-3’；所述POX-R下游引物的序列为：5’-AAAATAATGGAACTACATAGTA-3’；所述CPS-F上游引物的序列为：5’-ATTTTCTGCACCTTAGGGGCAT-3’；所述CPS-R下游引物的序列为：5’-ATATTCAATCTGTAAGACAGG-3’；所述PiHV-F上游引物的序列为：5’-GCGACAGGATCGTGGCCATCGA-3’；所述PiHV-R下游引物的序列为：5’-AAGTACTCGCAGAACCGCTGAC-3’。