[发明专利]一种从裸花紫珠中提取制备多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种天然产物的分离纯化方法，特别是涉及一种从药用植物裸花紫珠中提取制备多糖的方法。

背景技术

裸花紫珠(Callicarpa nudiflora Hook.et Arn.)为马鞭草科(Verbenaceae)紫珠属植物，主产于我国海南，是一种海南地道药材，在我国广东、广西也有分布。国外主要分布于印度、越南、新加坡和马来西亚。其枝、叶可入药，有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消肿，驱风祛湿之功效，主治化脓性炎症、急性传染性肝炎、呼吸道及消化道出血、创伤出血等症，外用治烧、烫伤及外伤出血等。

据文献研究报道，裸花紫珠药材的主要化学成分有黄酮类、鞣质、萜类、挥发油类等，其中萜类和黄酮能增加血小板的数量，缩短出血和凝血时间，对纤溶系统具有显著的抑制作用，收缩血管、止血效果显著，对炎症早期的渗出、肿胀有明显的抑制作用，加快创面渗出的吸收，促进伤口的愈合，对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、肺炎双球菌、绿脓杆菌等均有较强的抑菌作用；而鞣质能使创面的微血管收缩，具有局部止血作用。临床上常用于治疗细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，消化道出血等疾病。

现有技术中，裸花紫珠作为药材使用的方法是将枝叶凉嗮至近干后切段，采用水煎煮提取的方法得到浸膏后加入辅料制成片剂或者胶囊等口服制剂，用于治疗细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，呼吸道及消化道等腔道出血等症，疗效确切。但存在中药的服用剂量大，有效成分不明确、质量标准可控性差等缺点，这与中药的化学成分复杂，药物作用的机制尚不明确有关。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种从裸花紫珠中提取制备多糖的方法，通过上述方法能够分离裸花紫珠中的水溶性多糖成分，从而很好地控制裸花紫珠的质量，可用于裸花紫珠药材真伪及品质优劣的评价，保证其质量的稳定、均一、可控。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种从裸花紫珠中提取制备多糖的方法，其特征在于，包括：

备料步骤：将裸花紫珠叶进行粉碎，得到裸花紫珠碎片；

一次提取步骤：将裸花紫珠碎片加入质量为裸花紫珠叶的10-20倍的95％乙醇中，在室温下浸泡4-6h后，滤出乙醇溶液，同法用95％乙醇浸泡提取3-4次，合并醇提液回收乙醇；倒出乙醇提取过的裸花紫珠碎片至干净的台面上，晾干裸花紫珠碎片上的残余乙醇，得到一次提取物；

二次提取步骤：将一次提取物加入质量为裸花紫珠叶的10-20倍的水中煮沸30min，冷至50-60℃后倾出，同法用水再提取一次，合并水提取液减压浓缩至溶液体积为100ml，得到二次提取物；

初步纯化步骤：向二次提取物中加入95％乙醇，95％乙醇的加入量为二次提取物重量的3-4倍，当有絮状沉淀物析出，移出絮状沉淀物上部的醇溶液，然后加入定量的水至絮状沉淀物完全溶解；重复上述沉淀、溶解步骤，反复洗涤5-10次，用95％乙醇沉淀至上清液至无色为止，收集沉淀物，得到粗多糖；

精制步骤：将粗多糖用纯化水溶解后放入透析袋中，再将透析袋放入盛纯化水的容器内，透析24-48h，将透析液上G-100葡聚糖凝胶柱，水洗脱，收集含糖组分，得到裸花紫珠多糖。

进一步地，完成精制步骤后，还包括检测分析步骤：采用高效液相排阻色谱法联合CAD检测器，以葡聚糖作为标准溶液，用Thermo Fisher Ultra3000的Chromeleon 7Extension Pack GPC Templates软件作图分析，测得裸花紫珠多糖的数均分子量为16.79×10⁴，重均分子量为74.7×10⁴。

进一步地，完成精制步骤后，还包括检测分析步骤：用Thermo DIONEX ICS-5000+SP离子色谱测定裸花紫珠多糖的三氟乙酸水解液，发现裸花紫珠多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、核糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、果糖等单糖组成，其中葡萄糖含量最高、半乳糖的含量其次。

进一步地，备料步骤中，取新鲜的裸花紫珠叶，用清水冲洗干净，于阴凉处晾干，去除烂叶和虫斑后，粉碎至1-5mm，得到裸花紫珠碎片。

进一步地，备料步骤中，用剪刀剪碎或粉碎机进行粉碎。

进一步地，备料步骤中，裸花紫珠叶为海南省五指山市冲山镇沿河西路河边野生的裸花紫珠或人工种植的裸花紫珠。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：