[发明专利]基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

反应液和胶乳抗体试剂；

其中，所述反应液包括缓冲液、无机盐、增浊剂和防腐剂中的一种或几种；所述胶乳抗体试剂包括至少两种通过单抗混合后与胶乳微球偶联而成的胶乳抗体。

2.根据权利要求1所述基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒，其特征在于，在反应液中，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液或4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中的任一种；所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸钠和/或硫酸镁中的一种或几种；所述增浊剂包括聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和/或聚乙二醇8000中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒，其特征在于，所述胶乳微球的粒径范围为50-300nm。

4.一种基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、量取固含量为10％的胶乳微球，加至缓冲液中，离心，去上清，用缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬，加入碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，活化；再次离心，去上清，用缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬，制得活化后的胶乳微球；

B、取至少两种单抗，并进行混合，制得含有多种单抗的抗体；

C、将上述制得的胶乳微球和抗体按特定比例混合均匀，并进行偶联，制得偶联后的胶乳抗体；

D、向胶乳抗体中加入封闭液进行封闭，再进行离心，去上清，用保存液对胶乳抗体沉淀物进行重悬，制得胶乳抗体试剂；

E、称取缓冲液、无机盐、增浊剂和防腐剂，制得反应液，并将反应液和胶乳抗体试剂组成用于测定Lp-PLA2含量的试剂盒。

5.根据权利要求4所述基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒的制备方法，其特征在于，在步骤A，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液或4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中的任一种。

6.根据权利要求4所述基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒的制备方法，其特征在于，在步骤D中，所述封闭液包括小牛血清白蛋白、明胶和/或酪蛋白中一种或几种。

7.根据权利要求5所述基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒的制备方法，其特征在于，在步骤D中，所述保存液包括缓冲液、赋形剂、稳定剂、表面活性剂和防腐剂；其中，所述赋形剂包括海藻糖、蔗糖、麦芽糖和/或甘露醇中的一种或者几种；所述稳定剂包括小牛血清白蛋白、明胶和/或酪蛋白中的一种或几种；所述表面活性剂包括吐温-20、曲拉通X-100和/或十六烷基-3-甲基氯化铵中的一种或几种；所述防腐剂包括Proclin300和/或叠氮钠中的一种或几种。

8.根据权利要求4所述基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒的制备方法，其特征在于，在步骤D中，所述反应液中，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液或4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中的任一种；所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸钠和/或硫酸镁中的一种或几种；所述增浊剂包括聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和/或聚乙二醇8000中的一种或几种；所述防腐剂包括Proclin300或叠氮钠中的任一种。

9.根据权利要求4所述基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒的制备方法，其特征在于，在步骤C中，不同的单抗，其特定比例有所不同。