[发明专利]用于核酸检测的痰液收集管及痰液保存方法

说明书

本发明提供了一种用于核酸检测的痰液收集管及痰液保存方法，痰液收集管内置核酸酶抑制剂，pH值维持剂和脱水剂。本发明针对痰液样本中核酸易降解的问题，设计一种含有核酸保护剂的收集管，方便需要做痰液核酸检测的受检者在有痰时利用随身携带的收集管随时收集痰液，同时能够在室温条件下保护痰液样本中的核酸不被降解，给予受检者充足的时间(72小时)将样本送至(或快递)医院或其他检验机构进行核酸检测。

技术领域

本方法属于用于医学检测的样本保存技术领域，涉及一种用于核酸检测的痰液保存方法及收集管，技术关键在于保护痰液样本中的核酸不被降解。

背景技术

痰是人体呼吸道的分泌物，它是通过支气管纤毛运动上皮纤毛的运动，从肺部向上呼吸道推动，最后，通过人的正常咳嗽反射从气管内咳出排出体外，正常人痰很少，只是保持呼吸道湿润而分泌的少量粘液。当人吸入刺激性气体、尘埃、致病细菌、病毒等有害微生物时，上呼吸道就可能发生炎症；或者肺部发生疾病，如支气管扩张、肺脓肿、肺癌等，呼吸道就会分泌增加，痰量就会增加，而痰的性质也会发生变化，可以由粘痰变成干酪痰、血痰、黄脓痰等。根据痰液产生和排出机制可知，痰液中包含多种病原微生物、各类炎症细胞、脱落坏死的黏膜上皮细胞以及肿瘤细胞等。

目前在临床上，痰液样本主要用于痰液细胞学检测以及呼吸道病原体检测。其中，通过检测痰液样本中病原体的核酸来鉴定病原体的种类是目前最精准且最快速的呼吸道病原体诊断方法。可引起急性呼吸道感染的病原体中，病毒占主要地位，其次才是细菌、支原体、霉菌、原虫等。在原发的急性上呼吸道感染中，病毒感染高达90％以上。常见的呼吸道病原体有：结核分枝杆菌、呼吸道合胞病毒、腺病毒、EB病毒、流感病毒、肺炎支原体、风疹病毒、链球菌、葡萄球菌、肺炎衣原体、细小病毒B19、巨细胞病毒以及冠状病毒等。传统的病原体诊断方法是分离培养或者血清学检测，分离培养耗时长、操作复杂，不适用于临床急症的诊断；血清学检测很难在疾病做到早期诊断。随着荧光定量PCR以及多重PCR技术在病原体检测领域的快速发展，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、检测迅速、检出率高等特点，该技术已逐渐在临床诊断领域占据重要地位。此外，从肺癌高危人群及肺癌患者的痰液样本中提取核酸，可用于早期肺癌的预测以及肺癌患者的基因突变检测和治疗监测。综上，痰液样本中核酸检测在临床上具有重要意义。然而在实际操作中，痰液样本中的核酸(尤其是RNA)极不稳定，通常在温室条件下数小时就被降解。造成核酸降解的外界物理因素如温度、湿度、紫外线等；化学因素如强酸或强碱环境、水解反应等；生物因素如酶解及微生物侵染等。其中，痰液中细胞破裂释放的核酸酶以及操作过程中因污染引入的核酸酶是造成核酸降解的主要原因。此外，一般受检者，即使是处于发病期的患者，也不是随时能咳出足够量的痰液，多半患者在晨起后痰液量较多，却无法及时收集并保存痰液。

中国专利申请文件CN104263721A，公开了一种保护痰液中核酸(DNA和RNA)的痰纸及核酸提取方法，主要存在以下不足：(1)其专利所述的痰纸为方形或圆形纸片、信封式或盒式，此种痰纸易折损，不耐受外力挤压，痰液易外溢(尤其当痰液较多时)，采集痰液后不便于随身携带和运输；(2)其专利所述，在痰纸上浸润了主要成分为DTT(二硫苏糖醇)、EDTA(乙二胺四乙酸及其二钠盐)、Tris-HCl(三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲液)的核酸保护液，浸润的保护液含量较少，不能保证痰液样本与核酸保护液充分接触，对痰液中核酸的保护效果一般。

此外，目前已公开的用于保护核酸或细胞的相关专利，例如中国专利申请文件CN105145545A公开的《用于常温条件下长期保存和运输组织样本的核酸保护液》、中国专利申请文件106065400A公开的《一种核糖核酸保护剂、试剂盒、应用及保存方法》以及中国专利申请文件CN 104041484 A公开的《一种细胞保存液》等，这些专利涉及的技术均可用于保护组织或细胞的核酸。然而，这些专利涉及的技术对于痰液样本的实用性较差，主要原因有：(1)痰液样本具有粘度大、蛋白多、不易液化、易成团等特点，将痰液加入常规液体保护剂后，痰液易与保护剂分层，保护剂与痰液样本接触面有限；(2)有些专利涉及的保护剂成分比较复杂，如含有防腐剂、缓冲剂、螯合剂、酶抑制剂、固定剂等，保护剂成分多且成本高，不适合临床广泛使用。