[发明专利]微小RNA及其在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及微小RNA及其在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明提供的RNA分子为miR‑34a序列5’端第10位～第22位中的任一碱基突变为n，所述n为A、C、G或U；采用该RNA分子及其互补链能够抑制肿瘤细胞中PD‑L1、B7‑H3、B7‑H4等蛋白水平，抑制肿瘤细胞生长和/或增殖，从而起到抗肿瘤的作用。并且，研究表明，本发明提供的微小RNA在抗肿瘤的同时，对血清中细胞因子的分泌均没有显著影响。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及微小RNA及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

我国恶性肿瘤发病率和死亡率逐年上升，越来越受到医学界的重视，亦然成为基础研究和临床研究的重大课题。虽然肿瘤治疗取得了一定的进展，但离生存期的根本提高对生活质量的要求仍有一定的距离，探求更为安全有效的辅助治疗仍需更多努力。目前，肿瘤免疫治疗已成为继手术、化疗和放疗后的一种有效疗法而被广泛用于临床，尤其是基于免疫卡控点的阻断疗法。有效的抗肿瘤免疫治疗依赖于细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的有效活化，而T细胞的有效活化和功能介导依赖于抗原递呈细胞和T细胞表面的配体/受体对提供的协同刺激信号。其中，B7-CD28是迄今为止公认的最基本的协同刺激信号，包括B7-1、B7-2、B7h、PD-L1(B7-H1)、B7-H2、B7-H3、B7-H4等配体与CD28、CTLA-4、ICOS、PD-1、BTLA等受体提供的促进T细胞生长、分化和产生细胞因子的正性信号，以及限制、终止和/或减弱T细胞应答的负性信号。

PD-L1、B7-H3和B7-H4是近年发现的B7家族协同刺激分子的重要成员，均被发现在多种肿瘤组织中异常高表达，包括肠癌、胃癌、食管癌、肺癌、尿路移形细胞癌、肾癌和前列腺癌等；且其高表达与患者预后差显著相关。大量研究亦已证实，通过抑制PD-L1、B7-H3或B7-H4表达可以获得很好的抗肿瘤效果；目前，已经上市的PD-L1单克隆抗体药物有罗氏的Atezolizumab，用于治疗尿路上皮癌(膀胱癌)或靶向治疗和化疗失败的非小细胞肺癌患者，以及阿斯利康公司的Durvalumab用于治疗局部晚期或转移性尿路上皮癌患者。我们前期研究发现，PD-L1、B7-H3或B7-H4的表达均可被内源性微小RNA抑制。

微小RNA(microRNA)是近年来发现于真核细胞中的一类长约22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA，其5’-端第2-9个碱基(seed region)可通过与靶基因的3′-UTR结合，在翻译水平抑制蛋白合成，从而在基因表达中发挥重要的调节作用。迄今为止，人类基因组中已明确的微小RNA约有2588个(miRBase)，调控着至少30％基因的表达，而每一个微小RNA可能参与调控100～200个靶基因的翻译。微小RNA由于其广泛的调控作用参与了细胞的生长、分化、增殖和凋亡等生命过程，影响着几乎所有的信号通路，并参与各种生理病理过程，特别在肿瘤的发生和发展中发挥了极为重要的作用。

大量研究结果显示微小RNA在肿瘤中呈现异常表达，其中有的微小RNA表达升高而有的降低，分别通过抑制抑癌基因表达或上调癌基因表达，发挥着促癌或抑癌的作用。2002年，Clain等发现两个微小RNA基因miR-15和miR-16在慢性淋巴细胞白血病患者中常发生缺失，首次揭示了微小RNA与肿瘤的密切关系。之后，越来越多的微小RNA被发现在肿瘤中异常表达，如低表达的miR-34a、miR-143、miR-145和高表达的miR-21、miR-27a、miR-155等。业已证实，通过在肿瘤细胞中转入低表达微小RNA的模拟物(mimic和agomir等)，或者转入高表达微小RNA的抑制剂(inhibitor和antagomir等)，可以有效抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移，从而发挥抗肿瘤效果。