[发明专利]一株季也蒙毕赤酵母及其应用

权利要求书

1.一株防治苹果果实轮纹病的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1，于2015年12月31日保藏于：中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC NO:M2015814。

2.一种利用权利要求1所述的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1制备的生防菌剂。

3.权利要求2所述的生防菌剂在防治葡萄病害中的应用，所述葡萄病害为由病原真菌引起的葡萄白腐病、灰霉病、青霉病、褐腐病和炭疽病；

所述葡萄白腐病病原菌为白腐垫壳孢(Coniella diplodiella)、灰霉病病原菌为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、青霉病病原菌为青霉菌(Penicillium spp)、褐腐病病原菌为链核盘菌(Monilinia spp)和炭疽病病原菌为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1用于增强植物体内防御酶的活性，所述的防御酶为CAT、PPO、SOD和POD。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：使用时将季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1制备成菌悬液。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：制备得到的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1菌悬液通过喷施或浸润的方式施用于葡萄。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：制备得到的季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y-1菌悬液浓度为10³～10⁸cfu·mL^-1。

8.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂的制备方法如下：

1)培养基的制备：

酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基：酵母提取物(Yeast Extract)10g，蛋白胨(Peptone)20g，溶解于900mL水中，加入20g琼脂粉，121℃高压蒸汽灭菌20min后，加入100mL已灭菌的20％葡萄糖溶液；

酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)液体培养基：酵母提取物10g，蛋白胨20g，溶解于900mL水中，121℃高压蒸汽灭菌20min后，加入100mL已灭菌的20％葡萄糖溶液，分装于250mL三角瓶中，装液量为80mL；

2)季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的活化：将菌株按无菌操作要求划线接种于YPD琼脂培养基中，30℃恒温培养2-3d；

3)季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的液体培养：挑取步骤2)中活化的Y-1菌株的单菌落，接种于瓶装量为80mL/250mL的YPD液体培养基中，150r·min^-1，30℃恒温震荡培养24h，得到菌株Y-1发酵种子液，将所述发酵种子液按1:100的接种量接种到所述的YPD液体培养基中，30℃恒温震荡培养48h，得到浓度为10⁷cfu·mL^-1的季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的细胞培养液；所述细胞培养液为生防菌剂。

9.根据权利要求2所述的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂的制备方法如下：

1)培养基的制备：

酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基：酵母提取物(Yeast Extract)10g，蛋白胨(Peptone)20g，溶解于900mL水中，加入20g琼脂粉，121℃高压蒸汽灭菌20min后，加入100mL已灭菌的20％葡萄糖溶液；

酵母浸出粉胨葡萄糖(YPD)液体培养基：酵母提取物10g，蛋白胨20g，溶解于900mL水中，121℃高压蒸汽灭菌20min后，加入100mL已灭菌的20％葡萄糖溶液，分装于250mL三角瓶中，装液量为80mL；

2)季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的活化：将菌株按无菌操作要求划线接种于YPD琼脂培养基中，30℃恒温培养2-3d；

3)季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的液体培养：挑取步骤2)中活化的Y-1菌株的单菌落，接种于瓶装量为80mL/250mL的YPD液体培养基中，150r·min^-1，30℃恒温震荡培养24h，得到菌株Y-1发酵种子液，将所述发酵种子液按1:100的接种量接种到所述的YPD液体培养基中，30℃恒温震荡培养48h，得到浓度为10⁷cfu·mL^-1的季也蒙毕赤酵母Y-1菌株的细胞培养液；

4)将步骤3)中制备的细胞培养液，在4℃条件下，6000r·min^-1离心10min，收集菌体沉淀用无菌水重新悬浮，得到10⁸cfu·mL^-1的菌悬液；

5)稀释：将步骤4)中制备的10⁸cfu·mL^-1的菌悬液稀释0-100倍；得到生防菌剂。