[发明专利]912位点发生突变的RanBP9突变基因及其应用

说明书

本发明提供了一种发生了c.912G>T突变的RanBP9突变基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，它是人类男性生精障碍的致病基因。本发明还提供了基于多重PCR捕获联合二代DNA测序的RanBP9致病基因外显子突变筛选方法，最后利用Sanger测序对突变进行验证；其中PCR捕获引物组包含扩增引物序列SEQ ID NO:7‑12，用于Sanger测序的RanBP9基因c.912G>T突变片段的扩增引物序列如SEQ ID NO:11‑12所示。本发明提供的RanBP9致病基因形式尚未被报道，可以为该病致病机理的解析和检测方法的构建等提供依据和奠定基础。

技术领域

本发明涉及突变基因及其检测方法，特别涉及人类男性生精障碍致病基因RanBP9及其检测方法。

背景技术

生育年龄的男性中约有5%有不育问题，其中大部分的原因不明。男性生育能力依赖于有功能的精子，精子在睾丸内产生和发育的过程是由数个基因控制，这些基因的表达过程若受到干扰，就会影响精子的形成从而造成男性不育。研究（Jianqiang Bao, et al.,RAN-Binding Protein 9 is Involved in Alternative Splicing and is Critical forMale Germ Cell Development and Male Fertility. PLoS Genetics. 2014，10(12):1-14.）表明，RanBP9基因即RAN binding protein 9编码基因在老鼠睾丸中可以调控生育相关基因的表达，以保证精子的正常生成，因此RanBP9基因是目前精子形成过程中的关键调控因素之一。RanBP9基因编码RanBP9蛋白，RanBP9蛋白是在细胞内多个区域调节不同功能的多种蛋白复合体的关键组成部分，发挥支架蛋白的角色。RanBP9蛋白功能的发挥与多种生物过程相关，例如细胞增殖和凋亡、性腺的生长和发育等。如果RanBP9基因失去功能，精子的生成过程就会受到干扰，从而严重减低男性生育力造成男性出现少精、弱精等生精障碍。然而目前RanBP9基因在人类男性生精障碍中的遗传变异特征尚未得到解析，限制了该基因的研究和应用。

为了系统解析RanBP9基因在人类男性生精障碍中的致病突变，本发明设计和合成了覆盖RanBP9基因全部外显子的PCR捕获引物组，再结合二代DNA测序技术对25个男性生精障碍患者样本进行捕获测序，最终解析出了RanBP9基因的6种候选致病突变形式，所发现的突变均经Sanger测序确证；之后针对这6种致病基因突变，利用Sanger测序分析对应家系中其它成员的样本，发现携带致病基因突变的男性均存在生精障碍从而致病基因突变得到了确证。进一步的，采用同样的方法在另外37个人类男性生精障碍患者和100个生精正常的健康男性样本中进行了验证。本发明提供的男性生精障碍致病基因RanBP9突变均尚未见报道，其对于该病的解析和检测均具有潜在的重要价值。

发明内容

本发明提供了RanBP9基因引起的人类男性生精障碍的6种突变基因形式，同时提供了基于PCR捕获测序的RanBP9致病基因检测方法；这些可以为RanBP9基因引起的男性生精障碍致病机理的解析和药物开发、致病基因筛查和检测等提供依据和奠定基础。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：

本发明提供了RanBP9基因的6种突变基因形式（图1），其序列分别如SEQ ID NO:1-6所示，对应的突变分别为c.126C>T突变、c.133C>T突变、c.702T>G突变、c.912G>T突变、c.921A>G突变和c.926delC突变。RanBP9基因的这6种突变形式经检测和验证，均为人类男性生精障碍致病基因，可以被应用于构建人类男性生精障碍基因检测方法以及制备人类男性生精障碍基因诊断芯片、基因检测试剂盒和治疗药物中。