[发明专利]一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及属于生物技术领域，特别涉及一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明成功克隆了PGEX‑4T‑3‑ORF92质粒，筛选出一株抗Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的细胞株CyHV‑2‑ORF92‑1B7，首次获得了抗CyHV‑2‑ORF92的单克隆抗体，可特异性识别CyHV‑2病毒粒子和ORF92重组蛋白，可用于制备关于CyHV‑2检测诊断试剂、试剂盒、抗病毒药物的应用。

技术领域

本发明涉及属于生物技术领域，特别涉及一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体及其应用。

背景技术

鲫(Crucian carp)饲养成本低，养殖地域广，在我国淡水养鱼上占有重要地位，我国鲫鱼养殖主要集中在东部、中部和南部地区，如江苏、湖北、江西、安徽、山东、广东、四川、辽宁、湖南、浙江等省。据统计，2013年我国鲫鱼年产量达259.44万吨，其中主要养殖品种为异育银鲫(Carassiusauratus gibelio)。近年来，疱疹病毒性造血器官坏死病(herpesviralhaematopoietic necrosis， HVHN)频发，对我国鲫鱼养殖业造成了严重影响。HVHN是鲫的一种高致病性病毒病，其病原为II型鲤疱疹病毒(cyprinid herpesvirus2，CyHV-2)。CyHV-2与分离自鲤科鱼类的另外两种病毒鲤疱疹毒1(Cyprinid herpesvirus1，CyHV-1) 和鲤疱疹病毒3(Cyprinid herpesvirus 3，CyHV-3)亲缘关系较近，与沟鲶疱疹病毒(Ictalurid herpesvirus 1，IcHV-1)关系相对较远。Jung等在1995年对 CyHV-2进行了第一次报道，发现CyHV-2是金鱼造血器官坏死病的致病病原。接着，美国、澳大利亚、中国台湾、英国养殖的金鱼也爆发该病。自从2011年匈牙利首次在养殖的鲫体内检测到CyHV-2后，近几年来关于CyHV-2感染鲫的报道也逐渐增多，捷克、意大利先后报道了CyHV-2感染鲫并引起鲫大批量死亡的情况。在我国，多个实验室在2012年和2013年先后报道了CyHV-2感染鲫的情况。虽CyHV-2有比较高的致死率，但其可以感染的种类比较少，只可以感染金鱼、鲫以及它的普通变种。组织病理学研究表明，被病毒感染的鲫体表出血，伴随眼球膨出，腹部膨胀，内脏器官严重出血，鳔壁斑点状出血。这些报道均表明CyHV-2 是一种新生养殖鲫鱼病毒病，其发病区域在逐年扩大。CyHV-2病害已经引起我国水产养殖业管理部门及养殖户高度重视。

发明内容

本发明公开一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体及其应用，本发明成功克隆了PGEX-4T-3-ORF92质粒，筛选出一株抗Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的细胞株CyHV-2-ORF92-1B7，首次获得了抗CyHV-2-ORF92的单克隆抗体，可特异性识别CyHV-2病毒粒子和ORF92重组蛋白，可用于制备关于CyHV-2检测诊断试剂或设备中的应用。

为解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体,所述单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:C2017208杂交瘤细胞分泌，所述单克隆抗体特异性识别CyHV-2病毒粒子和ORF92重组蛋白。

所述杂交瘤细胞制备方法如下：以GST-ORF92重组蛋白为抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞。

所述GST-ORF92重组蛋白为抗原免疫的小鼠脾细胞的获得方法为：第一次免疫为腹腔注射，抗原与弗氏完全佐剂等体积充分乳化后免疫；14天后进行第二次免疫，抗原与弗式不完全佐剂等体积充分乳化后对小鼠腹腔注射免疫；7天后第三次免疫采用不加佐剂的抗原皮下注射免疫；7天后进行第四次不加佐剂的抗原皮下注射免疫。

所述的GST-ORF92重组蛋白的制备方法为：从Ⅱ型鲤疱疹病毒PCR扩增出 ORF92基因，将ORF92基因克隆至PGEX-4T-3质粒上，获得重组质粒 PGEX-4T-3-ORF92；将PGEX-4T-3-ORF92质粒转染到大肠杆菌中诱导表达出 GST-ORF92重组蛋白。