[发明专利]用于鉴定西藏米拉山地区大花红景天的特异引物及鉴定方法

权利要求书

1.用于鉴定西藏米拉山地区大花红景天的特异性引物序列，其特征在于它由引物序列

5’TCCGTTGCTGAATGTCTGTC3和5’ATCAAGCATGATTGTTGCGT3’组成。

2.一种使用权利要求1所述的特异引物序列鉴定西藏米拉山地区大花红景天品种的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）五种西藏不同海拔地区大花红景天基因组DNA提取；所述的五种西藏不同海拔地区大花红景天指的是：色季拉山、嘉黎、卧龙、浪卡子地区、米拉山地区的植株；

（2）基因组DNA的1%琼脂糖凝胶电泳检测；

（3）特异引物PCR扩增，在PCR扩增专用的离心管中加入： PCR缓冲溶液、dNTP、引物序列对：

5’TCCGTTGCTGAATGTCTGTC3’和5’ATCAAGCATGATTGTTGCGT3’

大花红景天基因组DNA、Taq聚合酶、无菌水补至25微升，将装有上述液体的PCR专用薄壁离心管放入PCR扩增仪中，扩增条件为： 94℃预变性300秒，94℃变性 30 秒， 56℃退火30秒、72℃延伸30秒，扩增35个循环，最后在72℃延伸600秒，扩增完成；

（4）PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测：配置1%的琼脂糖凝胶，在凝胶中加入溴化乙锭，0.5微克/毫升；在5微升扩增产物中及标准阳性Marker中分别加入1微升6×上样缓冲液，混匀，用移液器将上述混合液分别加入浸没TBE电泳液的琼脂糖凝胶的点样孔中，120V恒电压，电泳1800秒后停止电泳，凝胶直接在紫外灯下，紫外波长265nm或在凝胶成像仪上进行观察；

（5）结果判读：依照标准DNA marker带在凝胶上的位置鉴定是否为西藏米拉山地区的大花红景天。

3.权利要求1所述的特异性引物序列在快速筛选西藏米拉山地区大花红景天药材方面的应用。