[发明专利]一种高产聚苹果酸的出芽短梗霉及其用途

权利要求书

1.一种产聚苹果酸的出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)，其特征在于，其命名为出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)GXZ-6，保藏编号为CCTCC NO：M 2017517，保藏日期为2017年9月20日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学。

2.根据权利要求1所述的出芽短梗霉发酵生产聚苹果酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)菌种活化：将甘油保藏的出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)GXZ-6划线于PDA斜面培养基上，28-30℃恒温培养2-3天；

(2)种子培养：取活化好的斜面菌种一环，接种于装有50-100mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，摇床转速160-220rpm，25-30℃培养36-48h得到种子液；

(3)发酵培养：将种子液按照8-10％接种量接入装有30-40mL液体发酵培养基的250mL三角瓶中，摇床转速160-220rpm，25-30℃培养8-9天；所述液体发酵培养基的组分如下：碳源120-160g/L，硝酸钠2-4g/L，KCl 0.4-0.6g/L，KH₂PO₄ 0.05-0.2g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2-0.6g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.05-0.2g/L，CaCO₃30-50g/L；

(4)聚苹果酸提取：将发酵液离心去除菌体和残余碳酸钙，收集上清液并加入等体积无水乙醇，轻微搅动后静置1h，离心去除多糖沉淀，收集上清液并继续加入等体积无水乙醇，4℃静置过夜后，离心收集沉淀，沉淀物用80％乙醇洗涤，冷冻干燥后得到聚苹果酸。

3.根据权利要求2所述的出芽短梗霉发酵生产聚苹果酸的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的液体种子培养基的组分如下：葡萄糖80-100g/L，硝酸钠2-4g/L，KCl 0.4-0.6g/L，KH₂PO₄ 0.05-0.2g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.3g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.05-0.2g/L，CaCO₃15-30g/L。

4.根据权利要求2所述的出芽短梗霉发酵生产聚苹果酸的方法，其特征在于，所述的碳源为木薯淀粉、玉米淀粉、小麦淀粉、可溶性淀粉、淀粉糖化液和麦芽糖浆中的至少一种。

5.根据权利要求4所述的出芽短梗霉发酵生产聚苹果酸的方法，其特征在于，所述的淀粉糖化液是利用木薯淀粉、玉米淀粉、小麦淀粉或可溶性淀粉经过α-淀粉酶液化，然后用β-糖化酶糖化制取。

6.根据权利要求4所述的出芽短梗霉发酵生产聚苹果酸的方法，其特征在于，所述麦芽糖浆为市售麦芽糖浆。