[发明专利]一种肿瘤载药微颗粒制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种肿瘤载药微颗粒制剂，其特征在于，包括源自肿瘤干细胞凋亡释放的细胞囊泡和被包裹在所述细胞囊泡内作为有效成分的化疗药；

所述肿瘤干细胞源自于急性白血病、淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、绒毛膜上皮癌、子宫颈癌、肝癌、膀胱癌或皮肤癌中的肿瘤干细胞；

所述化疗药为阿霉素或5-氟尿嘧啶。

2.如权利要求1所述的肿瘤载药微颗粒制剂，其特征在于，所述肿瘤干细胞是用三维软纤维蛋白胶与肿瘤细胞于培养基中混合培养制得。

3.如权利要求2所述的肿瘤载药微颗粒制剂，其特征在于，所述肿瘤细胞与三维软纤维蛋白胶在培养基中的含量比为1～1.5×10⁴个:1.5～2mg。

4.如权利要求1所述的肿瘤载药微颗粒制剂，其特征在于，所述载药微颗粒制剂的粒径为200～600nm。

5.一种如权利要求1～4任一项所述的肿瘤载药微颗粒制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：肿瘤干细胞的筛选：用三维软纤维蛋白胶与肿瘤细胞于培养基中混合培养，筛选出肿瘤干细胞克隆球，即得到肿瘤干细胞；

S2：将化疗药物处理所述肿瘤干细胞使之凋亡，收集凋亡细胞所释放的载药微颗粒，该载药微颗粒即为细胞囊泡包裹化疗药后形成的所述肿瘤载药微颗粒制剂；或

使用紫外线照射所述肿瘤干细胞使之细胞凋亡，收集凋亡细胞所释放的细胞囊泡，然后将所述细胞囊泡与化疗药进行孵育，使化疗药物被所述细胞囊泡包裹，收集载药微颗粒，即得到所述肿瘤载药微颗粒制剂。

6.如权利要求5所述的肿瘤载药微颗粒制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，肿瘤干细胞的筛选具体步骤为：预先将肿瘤细胞用培养基稀释至1～1.5×10⁴个/mL，得到肿瘤细胞悬液，再与1.5～2mg/mL的三维软纤维蛋白胶以体积比1:1混合，向其中加入凝血酶混匀得到混合液后加入RPMI 1640培养基中进行培养，将形成的肿瘤干细胞克隆球挑选出，即得到肿瘤干细胞。

7.如权利要求6所述的肿瘤载药微颗粒制剂的制备方法，其特征在于，在将所述混合液加入所述RPMI 1640培养基之前，将所述混合液于37℃的温度下孵育10～15min。

8.如权利要求7所述的肿瘤载药微颗粒制剂的制备方法，其特征在于，在使所述肿瘤干细胞凋亡之前还包括用肿瘤干细胞培养基对肿瘤干细胞进行扩大培养的步骤；

所述肿瘤干细胞培养基为：含2g/mL HLA-B27、20ng/mL小鼠表皮细胞生长因子和1g/mL谷氨酰胺的DMEM-F12培养基。

9.如权利要求5所述的肿瘤载药微颗粒制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，在4～6℃低温下、以200～20000g的离心力收集载药微颗粒。