[发明专利]八目鳗口腔腺CystatinF、制备方法及应用

权利要求书

1.一种重组八目鳗口腔腺Cystatin F的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：

a. 将DNA序列如SEQ ID NO:2所示的基因克隆至表达载体pCold I并构建pCold I-Lm-cystatin F原核表达重组质粒；

b. 将pCold I-Lm-cystatin F原核表达重组质粒及含有分子伴侣pTf16的重组质粒同时转化至大肠杆菌BL21表达菌中；

c. 将阳性转化子接种至5 mL含有终浓度为0.1 mg/mL氨苄及终浓度为0.02 mg/mL氯霉素的LB培养基中，于37℃、120 rpm过夜振荡培养；

d. 将菌液加入到体积为500 mL的LB培养基中，于37℃、180 rpm培养至菌体达到对数生长期，即OD₆₀₀值为0.4~0.6；

e. 诱导表达：IPTG的终浓度为0.1 mM；L-Arabinose的终浓度为0.5 mg/ml；温度为15℃；转数为100 rpm；时间为24 h；

f. 采用His-tag亲和层析柱纯化rLm-cystatin F：采用0.22 µm的滤器过滤得菌液上清；上样平衡后分别采用40 mM、60 mM、80 mM、100 mM、200 mM、250 mM、300 mM、350 mM、400mM的咪唑洗脱并收集洗脱液，即得到重组八目鳗口腔腺Cystatin F。

2.一种如权利要求1所述方法制备的重组八目鳗口腔腺Cystatin F在制备抗血管新生药物中的应用。