[发明专利]苹果矮化砧木M9的组培快繁的方法

说明书

本发明苹果矮化砧木M9的组培快繁的方法属于农业技术领域，特别是涉及一种通过组织培养技术进行植物再生的方法。其目的是为了提供一种繁殖速度快、分化率高、成活率高的苹果矮化砧木M9的组培快繁的方法。本发明苹果矮化砧木M9的组培快繁的方法包括：(1)外植体的采集；(2)无菌体系的建立；(3)愈伤组织形成；(4)继代培养；(5)生根培养；(6)驯化出瓶。本发明苹果矮化砧木M9的组培快繁的方法具有繁殖速度快，分化率高，无病毒苗；可周年生产；成活率高，能快速育无病毒苗的优点。

技术领域

本发明属于农业技术领域，特别是涉及一种通过组织培养技术进行植物再生的方法。

背景技术

目前果园大多是广种薄收、高投入低产出的现状，加强对现有低产园的改造，提高单产和果品品质，是目前中国苹果生产发展的趋势。从国际上苹果生产中可以看到，果树的无病毒化栽培和改变果树栽培方式是两个主要的发展趋势。改变果树栽培方式的基础是使用矮化植株，矮化技术栽培有着诸多的优点：(1)幼树生长和成形快，成花容易，结果早，提前进入丰产期；(2)可大幅度提高土地利用率，可改变果园的粗放管理、广种薄收的情况；(3)种植密度较大，树体矮小，树冠紧凑，比普通砧木的树体小50％-70％，管理方便；在喷药、整枝修剪、人工授粉、疏花疏果、套袋、采果等方面都更容易，节省栽培成本；(4)矮化植株后短枝系数高、枝级少，树体光照条件改善，光合效能强、光合产物分配合理，果实着色好，果实品质高，单果重有所增加。

M9砧木利用常规繁殖技术生产的较少，主要是扦插不成活，而压条繁殖的苗木速度慢，质量差，无法脱病毒，一般均用组培快繁技术。M9组培与工厂化育苗技术产业化开发，不仅能推动了苹果苗木生产方式的变革，而且加速了苹果产业结构的调整和升级，在国内具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种繁殖速度快、分化率高、成活率高的苹果矮化砧木M9的组培快繁的方法。

本发明涉及一种苹果矮化砧木M9的组培快繁的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)外植体的采集；(2)无菌体系的建立；(3)愈伤组织形成；(4)继代培养；(5)生根培养；(6)驯化出瓶。

优选地，所述步骤(1)按以下步骤进行：在3月～5月，选择叶芽刚刚萌动的枝条，采集叶芽饱满的当年生枝条，用75％的酒精擦拭茎秆，然后剥掉外皮，剪成小段，每段保留两个芽，即为采集得到的外植体。

优选地，所述步骤(2)按以下步骤进行：取步骤(1)得到的外植体，先用75％的酒精浸泡20秒，再用0.1％的氯化汞浸泡10分钟，然后用无菌水冲洗8遍，得到消毒彻底的外植体。

优选地，所述步骤(3)按以下步骤进行：将步骤(2)消毒彻底的外植体放入启动培养基中培养产生愈伤组织；所述启动培养基为：MS+6-BA 0.8PPM+IBA 0.4PPM+KT 0.7PPM，蔗糖25g/L，pH值为6.2。

优选地，所述步骤(4)按以下步骤进行：将步骤(3)产生愈伤组织的芽，转入到分化培养基中进行继代培养，培养至每个芽体分化形成3-5个芽(约30d)；所述分化培养基为：MS+6-BA0.4PPM+IBA 0.2PPM+KT 0.3PPM，蔗糖25g/L，pH值为6.4。

优选地，所述步骤(5)按以下步骤进行：将步骤(4)分化培养得到的长度为2.5厘米芽转入到生根培养基中进行生根培养，得到生好根的瓶苗；所述生根培养基为：WPM+IBA0.5PPM，蔗糖25g/L，pH值为6.4。

本发明中以上操作步骤均在组培室内无菌台上操作。

优选地，所述步骤(6)按以下步骤进行：将步骤(5)生好根的瓶苗移至驯化室内，在光照5000LUX的条件下，驯化一周，然后打开瓶盖驯化一天，取出用清水冲洗干净，用多菌灵1500倍稀释液蘸根，晾干栽到穴盘中；在穴盘内生长两个月后，即完成本发明苹果矮化砧木M9的组培快繁，可移至大田栽植；