[发明专利]一种可溶性微针贴片及其制备方法

说明书

本发明公开了一种可溶性微针贴片及其制备方法。本发明首先提供了成套探针，由序列表的序列1‑序列9所示的单链DNA分子组成。本发明还保护将所述成套探针固定在芯片介质上得到的基因芯片。所述基因芯片可以检测待测样本中HBsAg位点突变情况。检测时从待测患者血清样本中提取病毒DNA，经体外扩增后，与芯片探针杂交，根据杂交信号判断突变类型。本发明提供的检测方法具有高通量、高特异性、操作简单、结果判断能自动化、容易进行标准化控制的优点，适合于HBsAg基因变异的临床检测应用，能够满足体检及献血员筛选的需要。

技术领域

本发明涉及一种可溶性微针贴片及其制备方法。

背景技术

乙型肝炎由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起。HBV属嗜肝DNA病毒科，为环状、双股DNA病毒，外层是脂蛋白包膜，含乙肝表面抗原(HBsAg)；内部是核心，含有核酸及乙肝核心抗原。

乙肝病毒S基因编码表面抗原(HBsAg)。HBsAg有重要的生物学意义，是乙肝疫苗的主要成分，是诊断乙肝病毒感染的重要依据。S基因区可分为S区、前S1区和前S2区3段，3段的5′端各有一个起始密码子(AUG)，但共用一个终止密码子。翻译的产物形成HBsAg的主蛋白(226个氨基酸)、中蛋白(281个氨基酸)和大蛋白(409个氨基酸)。S基因区的突变，特别是“α”决定簇氨基酸145位点的变异，会导致HBsAg抗原性改变，致使临床上广泛使用的HBsAg诊断试剂对其无法检出，造成漏检，由此可能会导致这类病毒携带者成为供血员，给受血者带来严重的后果。

目前用于HBsAg基因变异的分子检测方法主要有4种：(1)测序法：HBV基因检测的金标准，准确率高，但灵敏度较低，耗费时间长；(2)RFLP方法：原理为将待测的DNA片段用限制性内切酶酶切，以识别并切割特异的序列，将酶切后的产物进行电泳，根据DNA片段的大小来判断目的基因是否会有特异性序列，但标准化程度较低、对混合基因型检测能力较差，检测基因突变时，对于1个碱基以上的突变，需要多个检测系统分别检出；(3)定量PCR方法：灵敏度高，但通量低，难以检测多基因位点变异；(4)反向线性探针杂交法：先将已知探针分别点到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，与5’端标记生物素引物的PCR扩增的产物杂交，再经相应的显色反应显出杂交信号。肉眼判读容易误判，检测成本高，难以在国内临床实验室常规开展。

发明内容

本发明的目的是提供一种可溶性微针贴片及其制备方法。

本发明首先提供了成套探针，由探针P1、探针P2、探针P3、探针P4、探针P5、探针P6、探针P7、探针P8和探针P9组成；

所述探针P1为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述探针P2为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述探针P3为如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述探针P4为如下(a7)或(a8)：

(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；