[发明专利]一种检测大米中乙虫腈的化学发光免疫检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测乙虫腈的化学发光免疫检测试剂盒，属于免疫学检测领域。本发明的试剂盒由包被有乙虫腈‑载体蛋白偶联物的不透明白色酶标板、乙虫腈标准品、乙虫腈‑过氧化物酶标记抗体工作液、发光底物液、浓缩样品稀释液、浓缩洗涤液组成。所述乙虫腈‑载体蛋白偶联物是将乙虫腈与载体蛋白通过混合酸酐法或碳二亚胺法偶联得到，浓缩洗涤液含有0.05%吐温‑20。与传统的酶联免疫吸附分析法比较，本发明的试剂盒具有更高的灵敏度，且检测时间短、费用低，可用于大米样品中乙虫腈的残留量检测。

技术领域

本发明涉及一种检测乙虫腈的化学发光免疫检测试剂盒，用于检测大米中的乙虫腈含量或残留量。属于免疫学检测领域。

背景技术

乙虫腈（ethiprole）是一种新型吡唑类杀虫剂，化学名称为5-氨基-1-（2，6-二氯-对三氟甲基苯基）-4-乙基亚磺（硫）酰基吡唑-3-腈基。乙虫腈在环境中的代谢产物主要有：氧化产物RPA097973，为乙虫腈氧化后形成的砜；还原产物RPA107566，为乙虫腈还原后形成的硫化物。乙虫腈悬浮剂可用于水稻、蔬菜等多种作物，能有效防治多种咀嚼式口器和刺吸式口器害虫。随着乙虫腈的广泛施用，其在环境中的讲解归趋及残留状况就成为人们的关注热点。目前乙虫腈的测定方法主要为高效液相色谱法（HPLC）。

化学发光免疫检测技术是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光检测技术的高灵敏性和免疫分析技术的高特异性。本发明通过特有的免疫动物制备具有高亲和力、高特异性的乙虫腈抗体，并采用酶标记抗体，建立一种可以检测乙虫腈的化学发光免疫试剂盒，将为大米产品中乙虫腈药物留检测提供新方法，对保证畜产品安全提供重要的理论和实践依据，维护畜牧业健康发展具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来实现的。化学发光免疫分析是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高特异性。在整个反应过程中，样品中乙虫腈含量越高，反应体系中发光强度越弱；反之，样品中乙虫腈含量越少，发光强度越高。

本发明是一种检测乙虫腈的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于含有以下成份：

1、包被有乙虫腈-载体蛋白偶联物的不透明白色酶标板；所述乙虫腈-载体蛋白偶联物是将乙虫腈与载体蛋白通过混合酸酐法或碳二亚胺法偶联得到，所述载体蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、鸡蛋白蛋白、鼠血清蛋白或兔血清蛋白；

2、乙虫腈标准品；

3、乙虫腈-过氧化物酶标记抗体：该成分为用过氧化物酶标记的乙虫腈抗体，所述乙虫腈抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；

4、发光底物液：该发光底物液是以鲁米诺货异鲁米诺为发光剂的化学发光底物液，分为A液和B液保存，在使用前按1:1混合使用；其中A液位发光增强剂加鲁米诺货发光增强剂加异鲁米诺，B液为过氧化氢溶液或尿素过氧化氢溶液；

5、2倍浓缩稀释液；

6、20倍浓缩洗涤液；

本发明中，所述的不透明白色酶标板为96孔的可拆卸或不可拆卸的不透明白色酶标板。

本发明中，所述的乙虫腈标准品，由一系列不同浓度的乙虫腈标准品组成，浓度为0.02~5.12 ng/mL的浓度区间。

本发明中，所述的乙虫腈-过氧化物酶标记抗体为用过氧化物酶标记的乙虫腈抗体，如辣根过氧化物酶(HRP)标记的乙虫腈抗体。

本发明中，所述的发光底物液为商品化的任一种以鲁米诺货异鲁米诺为发光剂的化学发光底物液。

本发明中，所述所述2倍浓缩稀释液，其成分为0.01mol/L，pH7.4的磷酸缓冲液、甘氨酸-HCl缓冲液或Tris-HCl缓冲液，使用前请按1：1稀释（1份浓缩样品稀释液+1份去离子水）。