[发明专利]一种NT-ProBNP检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种NT‑ProBNP检测试剂盒，包括校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；预处理液中含有吡啶，酶结合物工作液中含有酶标记的NT‑ProBNP抗体，磁珠结合物工作液中含有NT‑ProBNP抗体标记的磁珠。上述的NT‑ProBNP检测试剂盒能够实现对全血样本中NT‑ProBNP的准确测定，试剂盒最低检测限为20pg/ml，线性范围为20～5000pg/ml，检测灵敏度高，线性范围宽，结果准确。本发明还公开了一种上述的NT‑ProBNP检测试剂盒的使用方法，其使用步骤简单，缩短了NT‑ProBNP的检测时间，有利于实现NT‑ProBNP的快速、灵敏检测。

技术领域

本发明属于免疫化学检测技术领域，具体涉及一种NT-ProBNP检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

B型利钠肽(B-type natriuetic peptide.BNP)是一种主要由心室肌合成和分泌的心脏激素，BNP与心房肽(ANP)、血管内皮细胞分泌(CNP)、肾小管合成和分泌(RNP)同属利钠肽家族成员。BNP具有利尿、利钠、扩张血管、抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统，抑制ACTH释放，抑制交感神经过度反应，参与调节血压、血容量、盐平衡等作用，最近研究显示BNP还有抑制心肌纤维化，抑制血管平滑肌细胞增生及抗冠脉痉挛等作用。氨基末端B型利钠肽(NT-proBNP)是proBNP的裂解产物。心肌细胞受牵拉或血管透壁压超负荷时，可促使proBNP大量合成和分泌释放，proBNP在分泌过程中或进入血液时分解为具有生物活性的含32个氨基酸的C端片段(BNP)和含76个氨基酸的N端片段(NT-proBNP)。相对于BNP，NT-proBNP在人体的生物半衰期较长(约1～2h；BNP约为20min)，血中浓度也相对较高(约为BNP的15～20倍)。因此，NT-proBNP被认为是较好的能反映心脏功能的生化标志物。

NT-proBNP测定的方法有电泳法、离子交换柱层析法、ELISA法和放射免疫法等。常规应用电泳法和ELISA法较多，但电泳法无法应用于全自动生化分析仪，所用仪器价格昂贵，所以无法普及；ELISA法操作过程复杂、检测时间过长，不利于实现NT-proBNP的临床快速检测。

中国专利文献CN104714025A公开了一种NT-proBNP检测试剂盒，利用荧光免疫层析法实现对NT-proBNP的检测。试剂盒内设有试纸卡，试纸卡由下自上依次设有：PVC板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中结合垫上吸附有稀土荧光微球标记的NT-proBNP单克隆抗体，稀土荧光微球掺杂稀土镧系元素，在基态下稳定，在340-380nm的激发光源作用下发射出波长范围在540-600nm的荧光。硝酸纤维素膜4上包被有NT-proBNP单克隆抗体(检测线)和羊抗小鼠IgG抗体(质控线)，当检测系统或检测环境中存在NT-ProBNP时，样本中的NT-ProBNP首先与结合垫上的稀土荧光微球标记的NT-proBNP单克隆抗体结合，然后受虹吸作用在在试剂卡上继续涌动，至检测线的位置时，与检测线上的NT-proBNP单克隆抗体结合，形成双抗体夹心复合物，通过检测上述复合物在特定光照下的发光情况，实现对样本中NT-proBNP的检测。上述的NT-proBNP检测试剂盒有利于实现血液中NT-proBNP的快速检测，并一定程度上提高了检测的灵敏度，但试剂盒的检测范围仅为0～20ng/ml，检测范围窄，限制了其在临床上的应用。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的NT-ProBNP检测试剂盒的检测范围窄的缺陷。

为此，本发明提供了一种NT-ProBNP检测试剂盒，包括：校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；所述预处理液中含有吡啶，所述酶结合物工作液中含有酶标记的NT-ProBNP抗体，所述磁珠结合物工作液中含有NT-ProBNP抗体标记的磁珠。