[发明专利]一种脂多糖诱导肿瘤细胞生成肿瘤干细胞的用途和方法

权利要求书

1.一种脂多糖在体外诱导肿瘤细胞转化形成肿瘤干细胞的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤细胞为前列腺肿瘤细胞。

3.一种利用脂多糖在体外诱导肿瘤细胞转化形成肿瘤干细胞的方法，其特征在于，包括：

(1)获取悬浮的单个肿瘤细胞，接种于培养皿中进行单层贴壁细胞培养，培养过程中加入脂多糖培养4～10h；

(2)添加胰蛋白酶消化，然后洗涤获得脂多糖处理后的单个肿瘤细胞；

(3)将脂多糖处理后的单个肿瘤细胞与干细胞培养液混合获得细胞悬液；

(4)细胞悬液经悬浮培养后获得肿瘤干细胞。

4.根据权利要求3所述的一种利用脂多糖在体外诱导肿瘤细胞转化形成肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述悬浮培养过程中经过一次以上的换液培养，换液培养的过程为：

细胞悬液在4％～8％CO₂、35～38℃的条件下培养形成单层细胞后，用胰蛋白酶消化，然后洗涤，最后加入干细胞培养液培养即可。

5.根据权利要求3所述的一种利用脂多糖在体外诱导肿瘤细胞转化形成肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述悬浮培养的换液次数为四次以上，悬浮培养的培养时间为两周以上。

6.根据权利要求3所述的一种利用脂多糖在体外诱导肿瘤细胞转化形成肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述肿瘤细胞为前列腺肿瘤细胞，单层贴壁细胞的培养基为RPMI1640+10％FBS。

7.根据权利要求3所述的一种利用脂多糖在体外诱导肿瘤细胞转化形成肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述脂多糖加入后的终浓度为0.0025～0.02ug/mL。

8.根据权利要求3所述的一种利用脂多糖在体外诱导肿瘤细胞转化形成肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述干细胞培养液包括DMEM/F12培养液，和终浓度为4～6mg/mL的胰岛素、0.4～0.6mg/mL的氢羟肾上腺皮质素、1～3％的B27细胞培养添加剂、18～22ng/mL的上皮生长因子。

9.根据权利要求3所述的一种利用脂多糖在体外诱导肿瘤细胞转化形成肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述细胞悬浮培养中细胞的浓度为3～5×10⁴细胞/毫升。

10.根据权利要求3所述的一种利用脂多糖在体外诱导肿瘤细胞转化形成肿瘤干细胞的方法，其特征在于，所述换液培养中采用预先经1.2％poly-HEMA处理的6-孔培养孔中加入2～3毫升，或者100毫米直径的细胞培养皿中加入8～12毫升进行培养。