[发明专利]用于检测小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条

说明书

本发明“一株可分泌PPRV‑H mAb的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C₁₂、其分泌的PPRV‑H mAb及包含该PPRV‑H mAb的胶体金免疫层析试纸条”，属于动物疫病检测领域。所述杂交瘤细胞株PPRV‐H4C12的保藏号为CGMCC No.13383。所述小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体由所述的杂交瘤细胞株PPRV‑H4C12分泌而得。所述试纸条包括所述抗体。该试纸条具有操作简便、成本低廉、现场操作、无需专业仪器、人员，结果直观可见，可快速、特异的检测血清中小反刍兽疫病毒H蛋白抗体。本发明适用于疫苗免疫动物中和抗体水平的快速现场评估。

技术领域

本发明属于动物疫病检测领域，具体涉及一株可分泌PPRV-H mAb的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C₁₂、其分泌的PPRV-H mAb及包含该PPRV-H mAb的胶体金免疫层析试纸条。

背景技术

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants，PPR)又被称为小反刍兽假性牛瘟，是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus，PPRV)引起山羊、绵羊以及包括野生动物在内的多种小反刍动物的一种急性、烈性传染病。目前PPR已被世界动物卫生组织(OIE)规定为法定报告传染病，我国农业部也将其列为一类动物疫病。PPR主要流行于撒哈拉以南的非洲、阿拉伯半岛和整个印度次大陆。2007年7月我国西藏地区首次发生PPR疫情，此后我国新疆、甘肃、内蒙古等多个省份均有该疫情发生的报道。PPR因其具有极高的发病率和死亡率 (70～80％)，在流行国家和地区对当地畜牧业造成了毁灭性的打击，给当地农场主和牧民造成严重的经济损失。因此，对PPR疫情的监测和防控关系到我国养羊业的健康发展，并具有重要的公共卫生意义。

小反刍兽疫病毒属于副粘病毒科麻疹病毒属成员，其基因组为单股负链 RNA，基因组全长为15,948nt，编码N、P、M、F、H、L 6个结构蛋白和C、V 两个非结构蛋白。在病毒的这些结构蛋白中，N蛋白保守性最强、抗原性也最稳定，能够刺激机体产生强烈的免疫应答，在PPRV的阳性血清中，针对N蛋白的抗体占主导地位，但是此抗体并不能起到中和病毒的作用，主要用于诊断研究，常作为诊断抗原。在病毒侵入宿主细胞的过程中H蛋白起到重要的作用，当病毒侵染细胞时，病毒通过H蛋白与宿主细胞的受体结合，然后病毒囊膜与细胞膜融合，使核衣壳进入受体细胞胞浆内，衣壳蛋白去蛋白化后，病毒基因组开始转录过程。H蛋白具有很强的免疫原性，能够刺激机体产生中和抗体，从而抑制病毒入侵宿主细胞。因些，通过检测血清中的H蛋白抗体水平，可以对PPRV 疫苗免疫情况进行评估。

目前，常用的实验室诊断技术分为：病毒分离培养、血清学检测和抗原检测。主要包括病毒分离、病毒中和试验(VN)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、琼脂凝胶免疫扩散(AGID)、对流免疫电泳(CIEP)、聚合酶链式反应(RT-PCR)、胶体金免疫层析以及其他分子生物学等检测方法。VN是国际贸易指定试验，但此方法检测时间长，检测的血清样品对细胞形态有较大影响，结果判定带有一定的主观性。PCR和竞争ELISA是被OIE指定为标准的检测方法，也是目前应用最为广泛的检测方法，但这两种方法都需要在实验室仪器设备配合的条件下才能完成。胶体金免疫层析技术是一种快速的诊断方法，与ELISA方法相比，它省去了繁琐的加样、洗涤步骤。因而这种分析技术操作简单快速,分析结果清楚,易于判断,且无须仪器,非常适用于现场快速检测。

目前，国内外还没有检测H蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条，无法现场检测血清中H蛋白的抗体水平，进行快速免疫评估。因此，建立这种迅速简便、针对H蛋白抗体的现场检测技术是一个亟待解决的难题。

发明内容