[发明专利]一种胃癌干细胞培养基及胃癌干细胞分离培养方法

说明书

本发明提供了一种胃癌干细胞培养基，它由基础培养基及添加物组成，其中，基础培养基为DME/F12，添加物及在基础培养基中的添加量分别为：B27 50‑150倍稀释、ITS 100倍稀释、Glutamax 2mM、非必需氨基酸0.1mM、表皮生长因子20‑40ng/ml、碱性成纤维生长因子10‑20ng/ml、β巯基乙醇0.1mM、葡萄糖3mg/ml、丙酮酸钠1mM、碳酸氢钠1mg/ml、乙酰半胱氨酸1mM、肝素4ug/ml。本发明还提供了所述培养基的用途及一种胃癌干细胞分离培养方法，本发明提供的培养基及分离培养方法，可以从胃癌细胞系中有效分离培养出胃癌干细胞，为全面研究胃癌的发病机制及侵袭转移打下良好的理论基础。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种胃癌干细胞培养基及胃癌干细胞分离培养方法。

背景技术

肿瘤干细胞(cancer stem cells)是肿瘤基础研究领域的热点和难点问题。现代研究认为，肿瘤干细胞是肿瘤中具有自我更新特性和分化为不同肿瘤细胞能力的一种细胞，被认为参与了肿瘤的发生、维持和进展等诸多过程。人们最初在急性髓系白血病中获得了肿瘤干细胞存在的证据，随着研究不断扩展，人们发现肿瘤干细胞存在于多种实体肿瘤中，如胃癌、结肠癌、前列腺癌等。

存在于胃癌中的肿瘤干细胞即胃癌干细胞(胃癌肿瘤干细胞，gastric cancerstem cell，GCSC)，随着干细胞和肿瘤研究的深入，GCSC已成为胃癌基础研究的热点，近年来研究报道GCSC可从胃癌细胞株、原发胃癌组织及患者外周血中被分离，涉及的胃癌细胞株有胃癌细胞株SNU-5(见王佳佳等，人胃癌CD90+干细胞可能影响胃癌的转移和患者的预后，中国肿瘤生物治疗杂志，2013,20:230-236)和胃癌细胞系SGC7901(吴丽霞等，胃癌细胞的无血清悬浮培养与初步鉴定，世界华人消化杂志，2014，1531-1536)等。

为了全面分析探索胃癌的发生发展，有必要扩展GCSC的来源细胞系，从更多的胃癌细胞系中分离出GCSC。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种可有效分离培养胃癌干细胞的培养基及分离培养方法。

本发明提供了一种胃癌干细胞培养基，它由基础培养基及添加物组成，其中，基础培养基为DME/F12，添加物及在基础培养基中的添加量分别为：B27 50-150倍稀释、ITS 100倍稀释、Glutamax 2mM、非必需氨基酸0.1mM、表皮细胞生长因子20-40ng/ml、碱性成纤维细胞生长因子10-20ng/ml、β巯基乙醇0.1mM、葡萄糖3mg/ml、丙酮酸钠1mM、碳酸氢钠1mg/ml、乙酰半胱氨酸1mM、肝素4ug/ml。

其中，添加物及在基础培养基中的添加量分别为：B27 50倍稀释、ITS 100倍稀释、Glutamax 2mM、非必需氨基酸0.1mM、表皮细胞生长因子20ng/ml、碱性成纤维细胞生长因子10ng/ml、β巯基乙醇0.1mM、葡萄糖3mg/ml、丙酮酸钠1mM、碳酸氢钠1mg/ml、乙酰半胱氨酸1mM、肝素4ug/ml。

其中，添加物还包括青霉素-链霉素，终浓度分别为青霉素100units/ml，链霉素100ug/ml。

其中，所述非必需氨基酸购自美国Life Technologies公司。

本发明还提供了上述培养基在分离培养胃癌干细胞中的用途。

其中，所述分离胃癌干细胞使用的细胞系为胃癌细胞系MKN74。

本发明还提供了一种胃癌干细胞的分离培养方法，步骤如下：

取胃癌细胞系，在上述方法制备的培养基中培养，既得胃癌干细胞。

其中，所述胃癌细胞系为MKN74细胞系。

其中，所述培养的方法为：每2天加培养基1次，每6天换培养基，