[发明专利]一种快速检测烟气体内代谢标志物的分析方法

权利要求书

1.一种快速检测烟气体内代谢标志物的分析方法，包括烟气样品净化富集前处理和分析检测两部分，所述代谢标志物为4-（甲基亚硝胺基）-1-（3-吡啶基）-1-丁醇（NNAL），其特征在于：先将代谢标志物采用在线制备的β-葡萄糖醛酸酶反应器进行水解后，再使用纳升级液相色谱-质谱进行分析检测，具体步骤如下：

1）首先制备β-葡萄糖醛酸酶反应器，具体方法如下：

（1）整体柱基质的制备：

A、将300 μL甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA）、100 μL三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸脂（TRIM）涡旋混合均匀；将850μL环己醇与150μL十二醇混合均匀；取250 μL 的GMA-TRIM混合液加入750μL的环己醇-十二醇混合液中；

B、称取10 mg的偶氮二异丁腈（AIBN）溶于上述混合液，超声脱气20min，涡旋10min至澄清透明，将其注入管壁活化后的毛细管柱中，用硅胶塞封住两端，50℃恒温水浴锅中反应24h；

C、用甲醇冲洗柱中未反应完的溶剂后采用超纯水冲洗，使用5mM醋酸铵缓冲溶液冲洗；

（2） β-葡萄糖醛酸酶的修饰：将100 U/mL-25000 U/mL β-葡萄糖醛酸酶溶液通入上述（1）所制备的有机聚合物整体柱中，使整体柱基质上的环氧基与β-葡萄糖醛酸酶的氨基一步反应完成酶的固定化；

2）烟气代谢物的水解

将浓度为0.05-1.0mg.mL^-1的底物4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁醇-β-O-葡萄糖醛酸钠盐（NNAL-O-Gluc）以0.1-1.0 μL/min的流速流穿过步骤1）制备的有机聚合物整体柱酶反应器，收集酶解液；

3）分析检测

将酶解液经过除盐、浓缩、复溶、超声、离心后，进行纳升级液相色谱质谱分析；

色谱条件如下：流动相A: 98%水:2%乙腈，0.1%甲酸； 流动相B: 98%乙腈-2%水，0.1%甲酸；色谱柱型号：3C18-CL-120；柱温：21°C；流速：300 nL/min；进样体积：8μL；梯度洗脱条件：0-0.1min，95%A∶5%B；0.1-5.0min，85%A∶15%B；5.0-8.0min，10%A∶90%B；8.0-8.1min，10%A∶90%B；8.1-10min，95%A∶5%B；

质谱条件如下：离子源电压为2300V；离子源温度为110℃；雾化气为6psi，辅助加热气为0psi，气帘气为30psi；去簇电压为80V，碰撞电压为10V；4-（甲基亚硝胺基）-1-（3-吡啶基）-1-丁醇（NNAL）的去簇电压：70V；碰撞电压：45V；碰撞电压差：5V；其糖苷衍生物4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁醇-β-O-葡萄糖醛酸钠盐的去簇电压为70V；碰撞电压：60V；碰撞电压差：10V。