[发明专利]一种猪轮状病毒VP6和VP7联合疫苗

说明书

技术领域

本发明属于疫苗制备技术领域，具体涉及一种猪轮状病毒VP6和VP7联合疫苗。

背景技术

猪轮状病毒(RV)引起猪腹泻及幼猪死亡,给养殖户带来巨大的经济损失。应用疫苗免疫已经成为降低相关发病率、病死率和减轻经济负担的一个重要途径。养猪场等动物养殖场是该病的其主要疫源地。目前临床主要应用减毒苗来进行防疫,但由于轮状病毒的多型性；以及减毒苗与野毒株基因重组,引起回复突变；养殖动物长期排毒,污染水源、食品；这些因素都给该病的防疫造成巨大困难。近年来国外深入开展了新型轮状病毒疫苗的研究工作,并取得了巨大进展。其中主要为基因工程疫苗的研究，通过基因工程方法表达轮状病毒的抗原，免疫动物或人，从而达到免疫保护的目的。基因工程疫苗主要包括核酸疫苗、合成肤疫苗、重组表达抗原疫苗以及轮状病毒类病毒颗粒(VLP)疫苗等。

但在目前使用的轮状病毒重组抗原亚单位疫苗研究中，由于轮状病毒基因组的多样性，导致制备的疫苗不能有效的预防不同基因背景的轮状病毒。且轮状病毒血清群和血清型众多,且不同毒株的生物学特性不同,故对轮状病毒的分离鉴定及相关特性的研究,无论是对该病毒的基础性研究亦或是对该病的应用性研究均具有十分重要的意义。

而且，国内猪轮状病毒疫苗的研发力度不够，而我国猪轮状病毒的感染率又非常高，因此国内需加快猪轮状病毒的研发进程。国内己有哈尔滨兽医研究所研制生产的猪传染性胃肠炎一轮状病毒二联弱毒苗和福建省生物药品厂同中国农大联合开发的TGE-PED-RV三联弱毒苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪轮状病毒VP6和VP7联合疫苗，能够有效预防目前流程的猪轮状病毒和新筛选的病毒株，从而弥补现有技术的不足。

本发明所提供的联合疫苗，其中包括疫苗抗原蛋白和疫苗佐剂；所述的抗原蛋白为氨基酸序列为SEQ ID NO:2的VP6蛋白和氨基酸序列为SEQ ID NO:5的VP7蛋白。

所述的抗原蛋白经过了灭活处理；优选是甲醛溶液灭活；

所述的疫苗佐剂为白油Span佐剂或氢氧化铝佐剂

编码VP6重组表达蛋白的核苷酸片段，其一种序列为SEQ ID NO:1；

编码VP7蛋白的核苷酸片段，其一种序列为SEQ ID NO:4。

作为优选，所述的亚单位疫苗中，VP6蛋白和VP7蛋白的含量为150-300μg/ml。

本发明在筛选获得了新型的VP6抗原基因的基础上，重组表达该VP6抗原蛋白，与现有的vp7蛋白一起作为抗原蛋白制成基因工程亚单位疫苗。本发明基因工程亚单位疫苗对已有的猪轮状病毒和新筛选的轮状病毒株具有良好的免疫效果。

附图说明

图1:VP6扩增产物电泳图；

图2：本发明筛选的VP6的blastp的结果图；其中Query为本发明的VP6；

图3：VP6的重组表达产物SDS电泳图；

图4：VP7基因扩增产物电泳图。

具体实施方式

首先对本发明所涉及的术语解释如下：

1、猪轮状病毒(RV)：

轮状病毒(Rotavirus，RV)是呼肠孤病毒科(Reoviridae)，轮状病毒属(Rotavirus)的成员。本属病毒略呈圆形，由11各双股RNA片断组成，有双层衣壳，直径65～75纳米。其中央为核酸构成的核心，内衣壳由32个呈放射状排列的圆柱形壳粒组成，外衣壳为连接于壳粒末端的光滑薄膜状结构，使该病毒形成车轮状外观，故命名为轮状病毒。各种动物和人的轮状病毒内衣壳具有共同的抗原，即群特异性抗原，可用补体结合、免疫荧光、免疫扩散和免疫电镜检查出来。轮状病毒可分为A、B、C、D、E、F等6个群，其中C群和E群主要感染猪，而A群和B群也可感染猪。

2、VP6抗原基因：VP6蛋白是RV病毒的特异性抗原，位于病毒的内壳，占病毒颗粒的51％。VP6蛋白主要刺激机体产生粘膜免疫抗体，在黏膜免疫中具有非常重要的作用。

3、基因工程重组亚单位疫苗：(Subunit vaccine)又称生物合成亚单位疫苗或重组亚单位疫苗，是指将保护性抗原基因在原核或真核细胞中表达，并以基因产物—蛋白质或多肽制成疫苗。

下面结合实施例对本发明进行详细的描述。

实施例1：VP6基因的筛选及序列分析