[发明专利]冷冻保护试剂，冷冻保护和冷冻保存的组合物，其用途，和冷冻保存方法

说明书

本发明涉及包括冷冻保护剂的冷冻保护试剂，所述冷冻保护剂是以下的一种或几种：糊精、葡聚糖、异麦芽糖寡糖及其衍生物，冷冻保护和冷冻保存的组合物，其用途，和冷冻保存方法。

本申请是申请日为2013年11月29日、申请号为201380062361.2、发明名称为“冻保护试剂，冷冻保护和冷冻保存的组合物，其用途，和冷冻保存方法”的中国发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及冷冻保护剂，冷冻保护试剂，冷冻保护组合物，冷冻保存组合物，其用途，和冷冻保存方法。

背景技术

活的生物样品如细胞，组织或器官(其是已经从一个供体来源获得的)的冷冻保存是在科学界和医学界非常重要的和具有很大实用性。冷冻保存通常是一个过程，其中样品，例如细胞或组织，通过冷却到零度以下的温度，通常为77K(＝-196℃，液态氮的沸点)而被保存。在这些低温度下，任何生物活性，包括会引起细胞死亡的生化反应，有效地被阻止了。冷冻保存技术通常用于长期保存含水或水性物质如植物和动物的细胞和组织。已知的是，通过冷冻这些物质，冰晶形成，导致不均匀的溶质浓度和污染物被水分子排除在外，称为“冷冻浓缩”。为了使细胞或组织被保存，冷冻保护剂的溶液通常是用来防止由于在冷却期间的冻结或解冻过程导致的损伤。为了使冷冻保存是有用的，冷冻保存的样品应在采集的时候保留它的完整性和生存力至合理的水平。因此，冷冻保存样品的过程本身优选不严重破坏或毁坏，例如细胞或组织结构。

在传统的冷冻技术，样品被采集，放置在存储溶液，然后冷冻保存。当样品被使用，它被解冻，例如从人类供体来源取得的细胞被恢复到正常的人体温度(即，约37℃)然后被放置在细胞培养基中。冷冻保存方案使细胞在整个细胞采集，冻结，解冻过程中经历多种应力和损伤。这些应力和损伤，可以对细胞造成不可逆的损伤。

葡聚糖已被用来作为人类，动物和植物细胞冷冻保护试剂(Odavic,R.etal.Experientia 36,1122(1980),Ashwood-Smith,M.J.et al.Cryobiology 9,441(1972)and Echlin,P.et al.J.Microsc.(Oxford)110,239(1977))。5％甲基亚砜和9％葡聚糖70的混合物被发现为人骨髓定向干细胞提供了最佳冷冻保存(Dextran,Handbook fromAmersham BioSciences,18-1166-12,AA版,35页)。针对单独或组合的葡聚糖，甘油和二甲基亚砜(DMSO)进行了人骨髓细胞冷冻保护的研究(Odavic,R.等人。Experientia 36，1122(1980))。与采用15％的甘油或9％葡聚糖以及1％DMSO相比，通过9％葡聚糖70与3或5％的DMSO的组合，以及单独的5或10％的DMSO，针对冷冻损害得到了显著优选的保护。葡聚糖40是已知(Proc.Nati.Acad.Sci.USA，卷92，10119-10122页，1995年十月，Medical Sciences)用于胎盘/脐带血冷冻保存，其为50％DMSO 5％(w/v)在葡聚糖40中的组合。

Shu Guowei等人在Advanced Materials Research,Trans Tech PublicationsLtd.,Vol.328(2012),pp 454-457中描述了，果糖寡糖，异麦芽糖寡糖，菊粉和低聚木糖在冻干过程中对B.bifidium生存力的影响。Kwan Hwa Park等在Database CA,XP 002698458中描述了含有果糖寡糖，异麦芽糖寡糖、半乳糖寡糖的冷冻保护试剂用于鱼糜。在KoreanSoc.Food Sci.Nutr.,Vol.30(3)(2001),pp 565-568中介绍了，果糖寡糖，异麦芽糖寡糖和半乳糖寡糖冷冻保护试剂对牛肉蛋白的影响。