[发明专利]一种鲟鱼精蛋白及鲟鱼精蛋白多肽的制备方法

说明书

本发明涉及一种鲟鱼精蛋白及鲟鱼精蛋白多肽的制备方法，除杂处理后的鲟鱼白切碎成浆状，加NaCl，NaEDTA和PMSF混合液均质匀浆搅拌，离心分离，沉淀物加硫酸提取，低温离心分离，滤液用NaOH调pH，透析除盐后用乙醇沉淀，用丙酮和乙醚洗，真空冷冻干燥得鲟鱼粗蛋白；经过纯化，得鲟鱼精蛋白。鲟鱼精蛋白用磷酸盐缓冲液匀浆，加酶，γ射线辐照，酶解得酶解液；酶解液沸水灭酶，冷却，加三氯乙酸溶液，离心分离，真空冷冻干燥得鲟鱼精蛋白多肽。本发明原材料丰富，天然无污染，制备的鱼精蛋白及鲟鱼精蛋白多肽具有高持水保水性，抑菌效果，可广泛用于食品、化妆品、药品领域；特别可作为抗肝素剂用于体外心脏手术中。

技术领域

本发明涉及蛋白及蛋白多肽领域，具体涉及一种鲟鱼精蛋白及鲟鱼精蛋白多肽的制备方法。

背景技术

鱼精蛋白是一种多聚阳离子肽，主要存在于各类动物成熟的精巢组织中，与DNA紧密结合在一起。鱼精蛋白具有较强的抑菌特性，在食品中主要用作防腐剂。与一般的化学合成防腐剂相比，鱼精蛋白具有许多优点，如安全性高、防腐性能好、热稳定性好等。而且，作为精氨酸含量丰富的蛋白类物质，鱼精蛋白具有很高的营养性和功能性，因此在食品应用研究范围广泛。鱼精蛋白也可与肝素的葡萄糖胺聚糖结合，是唯一与肝素形成拮抗作用的药物，可以快速有效地抵抗肝素或人工合成的抗凝血剂的抗凝作用，其在心脏直视手术和心导管介入治疗中有较大应用。鱼精蛋白多肽是鱼精蛋白的酶解产物，具有更小的分子量和异源性，可显著降低机体过敏风险，有效解决鱼精蛋白直接作用与机体时产生的过敏反应、免疫反应甚至休克的突发风险，使鱼精蛋白的应用更安全放心。而相比于鱼精蛋白，鱼精蛋白多肽具有更好的抑菌性，吸水持水性。通过辐照辅助酶解，得到更小分子量的天然活性蛋白肽类，具有高溶解性，高功能性等优点，有广阔的应用前景。

目前，市场上的鱼精蛋白主要提取自鲱、鲑科鱼等海水鱼，而且得率较低，而我国这类海鱼资源缺乏。鲟鱼具有高营养价值，蛋白含量高，而鲟鱼养殖业产量大，废弃物精巢组织原料充足。鱼类精巢除作为养鱼饲料及一部分腌制食品利用外，其它用途很少，价值低。如果从中分离出鱼精蛋白，利用蛋白酶抑制剂提高其提取得率，并在适当的领域应用则有望提高其附加价值，同时减少资源浪费和环境污染。

发明内容

本发明的目的是针对等问题，旨在提供一种原材料丰富，天然无污染，抑菌性能强，且具有高持水保水性和抗氧化性；分子量小的鲟鱼精蛋白及鲟鱼精蛋白多肽的制备方法。

本发明目的的实现方式为，一种鲟鱼精蛋白的制备方法，具体步骤如下：

1)取除杂处理后的鲟鱼白切碎成浆状，加0.14mol/L NaCl，0.05mol/L NaEDTA和0.001mol/L PMSF的混合溶液，均质匀浆搅拌1～3min，于0℃搅拌20min，静置10min，0℃低温离心，弃去上清液，重复3次，得沉淀物；

2)取步骤1)所得沉淀物按体积比1：5～1：8加入浓度为0.8mol/L～1.2mol/L的硫酸溶液，温度25～65℃，提取15min～60min，在0℃低温离心10min,过滤，取滤液，滤渣再重复用硫酸提取2～6次，合并滤液；

3)取步骤2)所得滤液用NaOH调节pH至7.0，透析除盐后用其体积三倍的95％冷乙醇沉淀，沉淀物分别用丙酮和乙醚各洗2次，真空冷冻干燥24h，得鲟鱼粗蛋白；

所述真空冷冻干燥条件为温度-50℃，压力10Pa；

4)将步骤3)所得鲟鱼粗蛋白经过两步纯化，得鲟鱼精蛋白；

所述两步纯化为Sephadex G-50葡聚糖凝胶层析和CM Sepharose Fast Flow离子交换层析纯化；

每步分离纯化前都加入0.5mol/L NaEDTA和0.1mol/L PMSF的混合溶液；