[发明专利]核酸测序文库中预定范围的核酸片段的筛选方法

说明书

本发明提供一种核酸测序文库中预定范围的核酸片段的筛选方法，包括以下步骤：将生物样本中预定来源的游离核酸构建核酸测序文库，对所述核酸测序文库进行预定范围的核酸片段的筛选，获得预定范围的核酸测序文库，所述筛选方法包括琼脂糖凝胶电泳筛选法、聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选法、磁珠筛选法的至少之一。本发明还提供一种确定生物样本中预定来源的游离核酸浓度的方法。本发明提供的目标核酸片段筛选方法，不仅能够有效的进行核酸片段的筛选及富集，提高目标核酸片段浓度，使得检测的结果更加精确，还能显著提高基因检测的最低检测限度，增加受检人群，使得更多的人群受益于基因检测方法，并且，该方法可以同时对多个样本进行目标区域DNA筛选。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体的，核酸测序文库中预定范围的核酸片段的筛选方法，及确定游离核酸浓度的方法。

背景技术

在过去的几年中，DNA测序技术出现了一个根本性的转变，从传统的Sanger测序发展到了所谓的“下一代测序”技术(Next Generation Sequencing,NGS)。尽管与传统的Sanger测序法相比，NGS技术相关的成本大幅降低，全基因组测序仍然是成本较高的。此外，有许多应用并不需要全基因组测序，而是需要对于一个或多个样品的特定区域进行测序。例如有效的全外显子(所有基因的编码部分)测序是目前比较主要的应用，但是针对较小的基因组或基因组区域的富集测序也被广泛应用。在靶向富集的过程中，不感兴趣的DNA片段被最大限度的去除,目标区域被从最初的全基因组测序文库中富集出来，使得后续NGS测序所产生的测序结果主要集中在感兴趣的目标区域。

因此需要在在测序前对目标DNA进行靶向筛选和富集，然后通过对富集的目标DNA进行测序，得到其携带信息，并根据测序得到的携带信息来解读想要的信息。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种简单快速并能同时对多个样本进行目标DNA片段筛选的方法。同时，还提供一种确定生物样本中预定来源的游离核酸浓度的方法。

基于以上目的，本发明一方面提供一种核酸测序文库中预定范围的核酸片段的筛选方法，包括以下步骤：

将生物样本中预定来源的游离核酸构建核酸测序文库，对所述核酸测序文库进行预定范围的核酸片段的筛选，获得预定范围的核酸测序文库，所述筛选方法包括琼脂糖凝胶电泳筛选法、聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选法、磁珠筛选法的至少之一。

本发明还提供一种确定生物样本中预定来源的游离核酸浓度的方法，包括以下步骤：

对上述获得的预定范围的核酸测序文库进行高通量测序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果；

基于所述测序结果，分别确定所述样本中染色体上根据预定长度划分的窗口数目及落入该窗口的序列数；

基于所述样本中染色体上所述窗口的数目及落入该窗口的序列数，确定所述生物样本中所述预定来源的游离核酸浓度。

本发明提供了一种目标核酸片段筛选的方法，不仅能够有效的进行核酸片段的筛选及富集，提高标核酸片段浓度，使得检测的结果更加精确，还能显著提高基因检测的最低检测限度，增加受检人群，使得更多的人群受益于基因检测方法，并且，该方法可以同时对多个样本进行目标区域DNA筛选。本发明进行目标核酸片段筛选及富集的方法，具有普适性，操作方案易实施，能够得到广泛的应用。

附图说明

图1是本发明一实施例中样品的凝胶照片，其中样品1是3个临床样本的混合文库，样品2是另外3个临床样本的混合文库。

图2是本发明一实施例中样品1的2100生物分析仪检测峰图。

图3是本发明一实施例中样品2的2100生物分析仪检测峰图。

图4是本发明一实施例中未筛选组和筛选组的胎儿浓度提高图。