[发明专利]香豆素衍生物作为KLK7的抑制剂在制药上的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是指香豆素衍生物作为激肽释放酶KLK7 的抑制剂用于胰腺癌的治疗。

背景技术

胰腺癌是一种恶性程度极高的消化系统肿瘤，病死率约占年发病率的83％。 20世纪80年代，胰腺癌的5年生存率约3％，到21世纪初达到7％。由于起病隐匿，加之胰腺具有独特的解剖结构和生物学特性，60％的胰腺癌患者确诊时已存在远处转移，且对传统放化疗等治疗手段不敏感，故预后极差，中位生存期仅6至9个月。胰腺导管腺癌是胰腺癌中最常见的病理类型，囊腺癌、神经内分泌肿瘤、肉瘤、腺泡细胞癌和淋巴瘤等病理类型临床相对少见。手术切除仍是目前治疗胰腺癌的主要措施，但由于缺乏有效的早期诊断，只有约10％～20％的病人就诊时适宜手术切除，这部分病人仅占胰腺癌病人总数的极小部分。70％～80％的病人由于肿瘤无法切除，必须通过非手术治疗来改善生活质量并延长生存期。即使是肿瘤切除的病人，既往研究也表明扩大手术范围和广泛淋巴结清扫并不能进一步提高胰腺癌的存活率。因此重视胰腺癌的早期诊断，提高胰腺癌早期确诊率，增加胰腺癌患者手术切除机会是提高胰腺癌存活率的一个重要环节。

人组织激肽释放酶7(kallikrein-related peptidase 7，KLK7)亦称角质层胰凝乳蛋白酶(stratum corneumchymotryptic enzyme，SCCE)，最初是从皮肤中提取鉴定的一种分泌型蛋白质。KLK7基因是激肽释放酶家族15个成员之一，与其他激肽释放酶基因在碱基序列水平有高度同源性，其编码的蛋白与同家族其他成员在氨基酸水平同源性亦较高，蛋白质三级结构和功能有很多相似性。在人体很多体液中均可检测到较高水平的KLK7蛋白，如：羊水、卵巢癌患者腹水、脑脊液、乳汁、唾液、精液、血清、关节滑膜液、尿液、汗液等。在皮肤中，KLK7通过水解细胞间介导凝聚的交界结构胞外粘合蛋白包括桥粒芯蛋白、桥粒糖蛋白等，导致皮肤的脱屑。国内外大量研究表明KLK7与肿瘤的侵袭与转移息息相关，其可能的机制是其水解细胞外基质，促进细胞脱离，肿瘤细胞借此更易侵袭与转移。 Vladimir Iakovlev等应用组织芯片免疫组化法检测包含胰腺癌不同发展过程(胰腺正常组织、胰腺上皮内瘤变与侵袭性胰腺导管腺癌)的全组织切片中KLK7 表达水平，以评估KLK7对胰腺癌预后意义，研究发现在胰腺上皮内瘤变进展中后期开始出现KLK7表达异常，胰腺导管腺癌中KLK7表达增高与预后不佳相关。另外，有体外实验研究显示：KLK7水解上皮型钙粘蛋白，产生的可溶性上皮型钙粘蛋白片段，可显著增强PANC-1细胞侵袭细胞外基质蛋白的能力，而胰腺癌PANC-1细胞聚集相应减少。提示KLK7可能在胰腺癌的侵袭和转移过程中起重要作用，胰腺癌细胞表面存在KLK7可造成肿瘤细胞脱落，导致肿瘤早期发生转移。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出香豆素衍生物作为激肽释放酶KLK7的抑制剂，能够有效的抑制KLK7的活性，可制备成治疗胰腺癌的药物制剂。

表一：香豆素衍生物抑制KLK7，37℃，pH8。

附图说明

图1：酶动力学实验，化合物1抑制KLK7。

图2:PANC-1细胞增殖实验，化合物1在3μM的浓度下抑制PANC-1的生长。

具体实施方案

一，酶动力学实验

1)将上述化合物溶解在DMSO中，配置成浓度10mM的母液；

2)在KLK7活性缓冲液中加入上述化合物，配制成等比稀释浓度梯度的溶液，并在37℃作用15分钟；

3)加入荧光底物Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC，在37℃下测KLK7的活性15分钟，采用荧光酶标仪检测荧光值，根据荧光值的大小计算KLK7的活性。

阴性对照组：在KLK7的活性缓冲液中加入DMSO，其它操作条件均与实验组相同。