[发明专利]一种与烟草黑胫病0号、1号生理小种抗性基因Bs_t连锁的SSR标记及其应用

权利要求书

1.一种与烟草黑胫病0号、1号生理小种抗性基因Bs_t连锁的SSR标记的应用，其特征在于，所述与烟草黑胫病0号、1号生理小种抗性基因Bs_t连锁的SSR标记的编号为TM51207和TM55805，其扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQID No.4所示；分子标记序列所对应的引物分别为：

TM51207序列的引物为TM51207F：5’- AAACGCTCCCAAATCTTCAA -3’，

TM51207R：5’- GGCAAAATCCTTACTAGTTCACG -3’；

TM55805序列的引物为TM55805F：5’- GAACTGGGAAGCTCACCAAA -3’，

TM55805R：5’- CCTCTCTTGCCCCTTTCTCT -3’；

应用方法为：以TM51207序列的引物和TM55805序列的引物分别扩增待检测烟草基因组DNA，检测PCR扩增产物：如果PCR扩增产物中分别含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列且不含有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示序列，即为含有抗烟草黑胫病0号、1号生理小种的纯合基因型Bs_tBs_t；如果PCR扩增产物中分别含有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示序列且不含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列，即为含有其感病的纯合等位基因型bs_tbs_t；如果PCR扩增产物中含有如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列，同时含有如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示序列，即为含有烟草抗黑胫病0号、1号生理小种的杂合基因型Bs_tbs_t。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，以TM51207序列的引物进行PCR扩增的反应体系为50μL，其中包含5.0μL的1×buffer，1×buffer 为10mM Tris-Cl、pH=8.4、50mM KCl、1.5mM MgCl₂，500μM的dNTPs，2.0μM的上下游引物，2.5U的rTaq聚合酶，30~100ng模板DNA，最后用ddH₂O补齐50μL。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，以TM51207序列的引物进行PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5分钟，按95℃变性30s、60℃复性30s、72℃延伸30s进行30个循环，72℃延伸5分钟，4℃保存。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，以TM55805序列的引物进行PCR扩增的反应体系为50μL，其中包含5.0μL的1×buffer，1×buffer 为10mM Tris-Cl、pH=8.4、50mM KCl、1.5mM MgCl₂，500μM的dNTPs，2.0μM的上下游引物，2.5U的rTaq聚合酶，30-100ng模板DNA，最后用ddH₂O补齐50μL。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，以TM55805序列的引物进行PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5分钟，按95℃变性30s、60℃复性30s、72℃延伸30s进行30个循环，72℃延伸5分钟，4℃保存。