[发明专利]一种高产杆菌肽A的地衣芽孢杆菌基因改组菌株及应用

说明书

本发明公开了一种高产杆菌肽A的地衣芽孢杆菌基因改组菌株及应用。本发明采取了育种新技术中的等离子体诱变技术，与传统物理、化学诱变方法相结合，并采用基因组改组技术，效果明显，产量提高显著。本发明提供的用于杆菌肽A高效发酵生产的基因改组菌株F2‑X1，降低了以地衣芽孢杆菌为发酵菌株，生产杆菌肽的成本。而且产量提高明显，经所述条件发酵后，杆菌肽A产量可达到1.7g/L,适用于大规模发酵生产杆菌肽A。本发明提供的以HPLC检测方法简单准确，是用于快速准确检测杆菌肽A产量。

技术领域

本发明涉及一种高产杆菌肽A的地衣芽孢杆菌基因改组菌株及应用，属于生物工程技术领域。

背景技术

杆菌肽是由是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌产生的一种对革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌有广泛抑制作用的环肽。根据氨基酸组成和位置的不同，现已发现15种同系物，其中杆菌肽 A，分子式为C66H103N17O16S，是其中主要的活性物质，生物活性也最强。由于杆菌肽高效、无残留及无毒副作用、并产生耐药性及交叉耐药性、排泄快等优点，广泛应用于饲料农业等。

由于自然筛选到的野生菌活力低，营养条件苛刻，产能较低，通过诱变及基因改组后，能有效提高微生物产能。

目前，除了传统的理化诱变技术外，近几年发展起来一种新的生物诱变育种技术：常压室温等离子体（ARTP）技术，由裸露金属电极结构的，大气压射频辉光放电等离子体发生器产生的活性粒子，如电子、离子、光子、处于激发态的中性粒子及一些自由基能作用于细胞的核酸或蛋白质，从而引起细胞基因突变或结构及通透性改变。与传统诱变技术相比，该技术操作简便，条件温和，适应范围广，而且诱变效果与其他诱变方法相结合能大大提高突变效果。ARTP技术虽然证明能有效引起基因突变，但是引起基因突变的机制还不清楚，产生的各种激发离子比例无法控制。

发明内容

技术问题

本发明为解决上述现有技术中所存在的技术缺陷，提供了一种高产杆菌肽A 的地衣芽孢杆菌基因改组菌株，目的在于，提高菌株发酵水平的同时降低发酵能耗和生产成本。

技术方案

为实现上述发明目的，采取的技术方案为：

一种高产杆菌肽A的地衣芽孢杆菌基因改组菌株，该菌株F2-X1保藏号为CGMCCNo. 14830。

所述高产杆菌肽A的地衣芽孢杆菌基因改组菌株的培养基为LB培养基。

所述高产杆菌肽A的地衣芽孢杆菌基因改组菌株可以在生产杆菌肽A方面得到应用。包括以下步骤：

（1） 斜面培养

地衣芽孢杆菌F2-X1在无菌条件下接种于固体斜面培养基上，37℃培养48h,其中所述的固体斜面培养基为LB培养基;

（2） 种子培养

将步骤（1）所培养的地衣芽孢杆菌在无菌条件下接种于液体种子培养基，37℃，180 rpm，培养12 h;其中所述的种子培养基为液体LB培养基;

（3） 发酵培养

将步骤(2)所述种子液在无菌条件下接种于培养基中，37℃，180 rpm，培养48 h;其中所述发酵培养基为LB液体培养基。

其中杆菌肽 A 含量检测包括:将步骤(3)所得发酵液离心除菌体，加入两倍体积无水乙醇，离心过膜后以HPLC检测杆菌肽A产量。

杆菌肽A的 HPLC检测方法为,以A：水+0.1%三氟乙酸；B：乙腈+0.1%三氟乙酸，为流动相进行梯度洗脱，其中，A相有30%线性增长为40%，时间为20 min,检测波长为220 nm，柱温35℃。

有益效果